作者tzengchichau (无)
看板Biotech
标题Re: 有关his-tag纯化
时间Wed Apr 30 06:30:47 2008
※ 引述《[email protected] (星空下的神话)》之铭言：
: 想请问一下各位先进
: 在纯化蛋白质中，我要纯化his-tag的融合protein，使用的是Ni-NTA来纯化，
: 想请教的部分就是：
: 1.为什麽buffer的ph值是保持在7.9呢?
PH值也会影响his_tag PROTEIN binding 但PH值只要7.4_到8都可以啊
不一定要在7.9。
: 2.binging buffer中有的会加入imidazole,这个物质不是只和histidine竞争Ni，为什麽
: 会用在binding buffer里呢?(其实也想问一下binding buffer的功能是什麽)
低浓度的IMIDizole是用来洗去column非专一性的结合蛋白。
也可以再加入高浓度的NACL这样最後收集的蛋白会比较纯
: 3.elution buffer中有imidazole我能理解，可是washing buffer中为什麽也有呢?
: 实验室使用的imidazole浓度分别为：
: 8X binging buffer：40mM imidazole
: 8X washing buffer：480mM imidazole
: 4X elute buffer：4M imidazole
: 求救一下了>"<
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◆ From: 219.68.86.29
1F：→ STEVENUA:嗯嗯，看来PH值是要看蛋白质而定!谢谢你哦^^ 04/30 12:53
2F：推 mouung:pH value不能太低 否则His变成protonated就bind不了Ni 05/07 17:51