作者beautyfish (天使光)
看板Biotech
标题[求救] Southern 背景值过深
时间Sat May 3 15:42:16 2008
最近很常问Southern的问题 因为实在有点走投无路了TT
之前好不容易有做出Southern
但最近又要做另外一批的数据
用的buffer都跟以前一样 只是温度改成65度 之前是用55度 因为片段的相似性比较低
可是这次做出来的结果都很奇怪
背景值很深 Sample的区域反白
我们家用的CDP-star是NEB的
之前用的酵素太久 所以买新的 可是我同学用了都有做出来
除此之外没有改变其他东西
但是压片半小时之後出来的都是黑呼呼的一片
我洗片的时间已经比protocol上所标示的时间延长了
实在想不出来是为了什麽原因
请板上的大大帮忙
非常的感谢
--
在大海中泅泳的鱼
你会不会也想要像飞鸟一样翱翔
还是心甘情愿的待在你的 水蓝色天堂
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.196.22
1F：推 yaliu:wash时的温度呢？？ 我通常都用0.5XSSC在68度wash两次 05/03 19:19
2F：→ yaliu:背景超乾净....不过我是用NBT/BCIP来显色啦，不是用压片 05/03 19:23
3F：推 ROKEE:贴图上来大家瞧瞧吧..... 05/03 20:48
4F：→ beautyfish:我也有用0.5X SSC在65度wash两次 但还是一样的脏 TT 05/04 10:34
5F：推 Remin:可以改probe的序列吗？ 另外请问blocking buffer 05/05 15:15
6F：→ beautyfish:因为我是要针对我的INSER去做HYBRIDIZATION 所以应该无 05/05 15:34
7F：→ beautyfish:法更改probe，Blocking solution处有什麽问题吗 05/05 15:34
8F：推 Remin:以前blocking含有ssDNA 温度用37度1hr，蛮乾净的 05/06 12:46