作者dropdred (keep the faith)
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标题Re: [求救]PCNA及Ki67的IHC
时间Sun May 4 09:27:30 2008
※ 引述《adamjr (hgd)》之铭言：
: 请问
: 有人做过这两个抗体的组织染色吗？
: 我用ab cam的都染不出来耶！
: 可否请有经验的人分享一下呢？
: 或是有人做过B6的脾脏免疫染色？
: 这个组织本身好染吗？
: 求求各位帮忙，谢谢!
我不是原po
但是最近用DAKO 染Ki67(MIB-1)也是染不出来
染的是neurofibroma
以下我只列出protocol中比较可能做变动的部分
在target retrieval的部分是用DAKO target retrieval buffer pH9
在水浴槽隔水加热煮20min
1抗(1:100) 4度C O.N.
DAB呈色 10min→但是完全没有颜色,後来在补染5min,还是没有
那一次同时染另外一支抗体,所以我很确信该加的我都有加
因为另外一支有染出来
因为1抗的部分已经是O.N.
DAB呈色的部分似乎也没有带大的改善
所以觉得target retrieval的部分似乎是要调整
想请教有染过Ki67的各位在target retrieval都怎麽处理??
谢谢大家...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.229.225.120
1F：推 tiresome:加H2O2步骤处理?? 05/04 23:47
2F：→ tiresome:有的热处理我会用autoclave 05/04 23:49
3F：→ dropdred:0.3% H2O2 10min 05/05 19:04
4F：→ dropdred:是有想过,但担心tissue剥落 05/05 19:05
5F：推 tiresome:担心剥落片子切完要用oven烘乾一下 05/06 09:12
6F：→ tiresome:另外看是不是脱蜡不完全,Xylin Alc有时失效没发现 05/06 09:13
7F：→ tiresome:腊没脱完全也可能会抗体上不去 05/06 09:14
8F：→ tiresome:最後 可能 抗体坏了........... 05/06 09:15
9F：→ dropdred:是有的,切完37度ON..但还是有些切片会有剥落的情形 05/06 18:00
10F：→ dropdred:送切片室切的..所以品质我没法掌控.... 05/06 18:03
11F：→ dropdred:谢谢~我会在试试看的... 05/06 18:04