※ 引述《chvkimo (达)》之铭言： : ※ 引述《imbi ()》之铭言： : : 请问做过comet assay的饼又 : : 要怎麽把low melting gel铺平在玻片上呢?? : : 我昨天第一次试做 : : 发现最大的问题是我的GEL会呈现凸凸的(表面张力那样) : ^^^^ 没遇过 是你的玻片没有磨砂过吗? : : 根本无法再加一片盖玻片 : ( 胶还没凝固 就盖起来了阿,为什麽会盖不起来??!! ) : : 照相起来也很难对焦... : : 然後就是跑胶的时候 或许是过热了吧 : : gel竟然自己也给我漂浮的跑起来 XD : : 还好有被我捞回来 : : 另外 实验进行过程中有需要避光吗 : (电泳时要避光) : : 我看了几各版本的PROTOCOL 有的说要 有的没提 : : 我是不太清楚为什麽需要避光... : : 还请板上的先进给我一点建议了 谢谢! 我做comet assay的经验不是很多 也许没有办法完全解决您的问题 但是我试着提供自己的经验与想法供您参考 就像C大所说 cover slip是在gel load到slide上之後 立刻盖下去的 如果盖了之後还会凸凸的(中央高 周围低?) 那我想可能会有几个原因 1. 盖得太慢 2. gel浓度太高 3. gel loading量太多 以至於cover slip无法将gel压平冷却 至於对焦很难对到的问题 我想gel再怎麽薄 也会超过一个cell的直径 cell在gel中不会只分布在一层 不过只要gel不要太厚 照相时移动视野 也只要微调焦距即可 应该不会造成很大困扰 倒是跑胶时gel漂起来 根据我以前的经验 应该是磨砂玻璃抓gel的效果不好 有的slide就是抓不住gel 以至於我每次做完实验都要乖乖快点把slide洗乾净 因为好用的slide很难找 XD 另外 关於避光 如果是指染色前的避光 (萤光染色要避光是理所当然的) 我听过有人是认为要避免日光灯或是阳光中UV影响实验结果 尤其是电泳前还要作in-gel digest时 我们总是希望DNA damage都是来自於自己可以掌控的实验设计嘛~ 不过根据我以前的实验经验 避不避光好像没差 XD 以上供您参考 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 61.231.11.4 ※ 编辑: myrna 来自: 61.231.11.4 (05/04 23:29)