作者Doser7 (豆)
看板Biotech
标题[求救]请问病毒纯化方法
时间Sun May 4 23:44:24 2008
小弟目前纯化病毒不太顺利
想请问各位大大有关病毒纯化的方法
我是用CSCl不连续密度梯度离心法 纯化细胞内的病毒颗粒
将CSCl溶於TNE内 以40% 4ml, 30% 3ml, 20% 2ml
利用5ml塑胶管逐步沿着管壁加入离心管内
1,请问各位在拉梯度时是用什麽器具将CSCl注入离心管内?
我是先加高浓度在逐次往上加低浓度
但书上大多写先加低浓度再加高浓度於低浓度下，将低浓度往上推
2.是否一定要拉出40% 30% 20%间有明显界线呢?(避免各层间混合)
3.当CSCl不连续梯度拉完後，是否须马上在顶部加入待离病毒液呢?
4.当离心时间很久会不会将待测物离过头呢?(跑到离心管底部)
5.如果改用”等密度”梯度离心是否更适合呢?
因为看了很多网路资料有太多方式不知如何择一
想请问板上各位大大的经验分享，先谢谢大家罗
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.112.128.236
1F：推 rivis:1. 都可以，看你方便 2.3.4.是一样的问题，CsCl经长时间 05/06 11:46
2F：→ rivis:离心，其实就会形成gradient，病毒自然会落在你想要的分层 05/06 11:47
3F：→ rivis:请较详细说出你遇到的问题，不然不知道该如何帮你 05/06 11:48
4F：推 haleywen:我做分层是先放最轻的，然後从最下面依序放入其他层，但 05/08 23:23
5F：→ haleywen:是，要小心放其他层时不要有泡泡，吐到剩下一点时要停 05/08 23:24
6F：→ haleywen:不过做不同病毒有不同方法，查一下你的病毒适用的梯度 05/08 23:26