作者mason (牲牲不息)
看板Biotech
标题Re: [求救] SDS-PAGE dye往上浮
时间Wed May 7 14:41:05 2008
感谢各位大大的解答,
後来发现确实是因为0.1M ammonium acetate(高盐度)的关系造成
glycerol比重不足而往上飘,
所以我就将sample和 sample buffer和agarose混合成 0.5%左右的mixture,
加热冷却再稍微加热溶解後趁还没凝固就注入well
凝固後就不怕他飘出了了^_^
後来就一切顺利了, 给大家参考, 也许遇到类似的情况可以试一试^^
谢谢大家, 这里都是好人:)
※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言:
: ※ 引述《[email protected] (牲牲不息)》之铭言:
: > 我的sample 是溶在 0.1M Ammonium acetate
: > 加了sample buffer 然後 Load 进 well 都还正常
: > 在要通电跑胶前会先用 running buffer 补满well
: > 问题来了
: > 除了Marker 的蓝色是沉淀的外,
: > 我的sample well的蓝色solution 都浮了起来
: > 使我不敢继续补满,
: > sample 会随着dye会往上溢出去污染到其他的well
: > 更不敢把电泳槽架上加buffer, 会全部飘出去吧XD
: > 现在情况很囧, 有没有人有类似的经验可以帮帮我QQ
: > 谢谢
: 很奇怪的做法
: 你的意思是说你是先把 sample load 到空的 well (里面只有空气)里面
: 然後再灌 running buffer?
: 我觉得这样应该不对吧
: 应该是先灌满 running buffer, 然後再 load sample
: 如果这样还会漂的很严重 就是你的 sample buffer 配制不当了
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: 或者如果你说的 load 的过程里面
: 因为设备有一些渗漏而导致 running buffer 液面下降
: 则我的习惯是先run 一下 让 sample 都跑进 stacking gel 里面以後再补满
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