作者alienwhale (Dear John letter)
看板Biotech
标题clone很多次都没有成功---求救
时间Sun May 11 22:37:45 2008
最近在cloning 作了很多次都没有成功
我的vector size 是9kb
insert size 是300bp
RE 是用 BsiwI 和 DraIII
试了好几次 就是没有成功
想请问一下 各位大大 有什麽建议 感谢
我的比例1:3 1:5 都用过了
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如果爱情像一部电影
你会选择看清楚沿途的风景
还是有一个你所想要的ending...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.112.169.238
1F：推 intotheman:大小差距蛮悬殊 确定Enzyme都有切动 insert用到10看看 05/11 23:58
2F：推 yaliu:如果都有切动，有时候可能是ligation失败吧 05/12 00:59
3F：→ yaliu:确认看看ligase和ligase buffer有没有问题 05/12 00:59
4F：→ ckshmin:ATP 也很重要唷 05/12 22:46
5F：推 newbeetle:DNA total < 30 ng 有时候放太多去接反而接不动 05/13 11:36
6F：推 inchew:1:15或1:20试试，我的I:V=150b:9K用这比例有成功 05/17 05:06