※ 引述《albertwang (会思考的鱼)》之铭言： : ※ 引述《linker0726 (哀..烦阿)》之铭言： : : http://clincancerres.aacrjournals.org/cgi/content/full/12/1/43 : : 我看了这篇文章 : : 有一个地方很不解 : : 就是他Fig. 2跑Gel时确认时，本来WT的不是已经用限制酶切过了(配合Fig. 1) : : 应该是会断成好几个片段(应该是两个) : : 为什麽到这边就变原来的一段了呢~? : : 注:WT分别是A图的138bp和B图的130bp : : 感谢 : 首先我在对全部基因的seq时发现一件事情 : paper上的enon跟NCBI genebank不同刚好跳一下 : 在 paper 在 NCBI : exon19 等於 EXON21 : exon21 等於 EXON23 : 这是一件粉神奇的事情 : 一开始我以为是isoform : 但是刚刚再却确认一次(不过有可能我太累了 有高手帮指正) : 还是一样 : 再来你的疑问 : 这不困难重点在他的primer设计 : NC_000007.这是基因的代号NCBI的 : EXON 21 : ATCCCAGAAGGTGAGAAAG(aTAA)AATTCccgtcgctatcaaggaattaagagaagcaacatctccgaaagccaaca : aggaaatcctcgatgtgagtttctgctttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcagg : EXON23 : cagccaggaacgtactggtgaaaacacCGCAGCATGTCAAGATCACAGATtttgggc(tggcca)aactgctgggtgc : ggaagagaaagaataccatgcagaaggaggcaaagtaaggaggtggctttaggtcagcc : AGCATTTTCCTGACACCAGGGA : 大写部分是primer : ()部分是限制每 : 他对限制脢改变所以pcr结果会出现图2 : 至於图1陷阱需要看实验方法才能董 : 这你就自己读一下罗 : 呵呵加油 图一有陷阱? 其实我看不懂图一最後Wild的画法 好几条虚线代表什麽? 而且跑完第一次PCR用限制酶切後 到底第二次PCR时会不会再放大 它好像也没讲到 我觉得图二应该跟图一之後无关 他只是要测它的敏感度 所以用WT下去稀释 直接下去跑PCR 然後用同样的限制酶切 这边看来 好像第一次PCR完用限制酶切 之後好像会在黏回去? 不过不知道会不会再放大? --

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