作者xareelee (XareeLee)
看板Biotech
标题Re: [求救] DNA纯化方法 (不用phenol去除protein)
时间Fri May 23 04:52:41 2008
※ 引述《seal0413 (seal)》之铭言:
: 我不知你要看的protein和DNA的interaction
: 哪个是已知或哪个是未知的
: 我想针对你的实验目的不同
: 可选择的实验方法也不同
: 假设是针对已知的DNA片段和已知的protein
: 而且只是要探讨interaction或者是还有哪些protein和此protein
: 共同作用在此DNA片段
: 你或许可以考虑用chromatin IP
我现在要做的 就是chromatin IP的变形
以前是用antibody去针对有兴趣的protein做IP 纯化出目标蛋白
找出其binding的DNA
而我要做的 是直接纯化出所有的DNA(已经有用甲醛将protein固定)
然後在纯化出被固定的protein 而可被质谱分析
==
老师原本是打算直接用酒精沈淀 挑出成丝状的DNA 经过wash後洗掉没被固定的protein
想法上是可行的 但是实际上......
我学长之前做出来发现 即使没有用甲醛固定的DNA 而只单纯经过酒精萃取
依然有太多protein的污染 也就是ctrl组的background太强
经过SDS-PAGE和silver stain发现 有或没有甲醛固定的结果几乎一样(因此尚未做质谱)
==
据我理解 由於phenol对於protein疏水性残基有亲和力
因此经过phenol/chloroform会把已经甲醛固定蛋白质的DNA也被带往离心後的水层交界处
所以必须找其他方法纯化出genomic DNA
目前我知道的 好像可以用hydroxyapatite column利用HPLC方式来做分离
但是这样成本高
(另外我也不知道有没有更适合的column可以用)
目前希望是有抛弃式的小型column(beads)或kit可以使用
但是我不知道有没有合适的产品可以使用
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.62.151
1F:推 seal0413:我想micropure你应该可以试试~1个column约25元左右 05/23 11:20
2F:→ seal0413:应该可以去掉没binding的protein 05/23 11:22
3F:→ xareelee:谢~ 05/23 21:50