作者XD7103 ()
看板Biotech
标题[求救] 小片段蛋白表现
时间Tue Feb 11 12:14:45 2014
大家好~
小妹在实验上遇到一点困难，想请问一下大家><
目前因为实验上的需求想纯化小片段的蛋白
首先将蛋白依domain切成四个部分construct到pET-22b(+) Vector
定序结果都ok
但是利用BL21-CodonPlus Competent Cell表现的结果
只有一段可以表现在上清液，其他三段则是都不表现
目前试过的条件有25度及37度
IPTG的浓度试过0.5mM及1mM
由於是第一次纯化，也不是很确定可以再修改那些条件
想请问大家是否有其他的建议
感激不尽!!!
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◆ From: 140.112.121.239
1F：→ blence:这样猜是有点蠢...是只有前面第一段会表现,後三段都不表现? 02/11 12:31
2F：→ XD7103:不是耶 是只有第二段表现@@ 02/11 12:38
3F：→ Ianthegood:所以是4个construct四组菌的意思? 02/11 14:59
4F：推 huangsw:先从whole cel lysate看看有没有你要的分子量 02/11 15:34
5F：→ huangsw:另外要不要找找inclution body的可能性？ 02/11 15:35
6F：→ XD7103:I大~ 没错!是有四组菌~~~ 02/11 16:33
7F：→ XD7103:H大~有压片看过tag，分子量接近的地方都没有band >< 02/11 16:34
8F：→ milkpa:挑其他clone试试看 02/11 17:12
9F：→ kshsdeck:真的表现不出来的话 只能换vector 试试pET系列的tags 02/11 17:23
10F：→ storm780121:可以试试抓不同表现时间看看 02/11 17:30
11F：推 kg9101266:请问induction时间以及分子量? 02/11 23:31
12F：推 CACALALA:我建议你换换vector@@ 02/12 09:25
13F：→ XD7103:分子量大约20KD左右，induction时间有试过4小时及18小时 02/12 10:49
14F：→ XD7103:C大~请问一下这个vector不好用吗？因为有一段ok所以也没想 02/12 10:51
15F：→ XD7103:过vector可能有问题XD 02/12 10:51
16F：→ Ianthegood:RNA有没有表现? 02/12 11:59
17F：推 abcm1042:换个vector或是温度可以低到15度 IPTG 也可以试看看0.1~0 02/13 23:34
18F：→ abcm1042:.3mM 或是你有试看看纯化看看会不会有呢? 02/13 23:35
19F：→ abcm1042:frame有没有对? 02/13 23:36
20F：→ XD7103:Frame是对的~我试了0.1mM IPTG等结果罗~感谢！！ 02/14 18:03