我後来买了takara的procolagen type I c-peptude (PIP) EIA kit 取上清(不含FBS)不用处理但须适当稀释 直接Load入kit coating 好的well 然後再照步骤添加试剂反应 整体满简洁好用的 kit有附标准品可以做标准曲线 我有测出来，但趋势有点... 总之提供你做参考罗 ※ 引述《haaaaaa (work hard work smart)》之铭言： : 标题: [求救] 关於测collagen含量 : 时间: Mon Nov 18 09:46:24 2013 : : 最近用6cm dish养fibroblasts并打算抽取其上清及ECM中的collagen，不过遇到了困难，想在这里请教各位前辈，有没有什麽特别需要留意的地方…以下是我follow一篇paper中方法：以0.05M acetic acid将细胞刮下，并加入10mg/ML pepsin，4度反应隔夜，接着使用10000 rpm离心10分钟，取上清，并加入3倍体积之neutralization solution (200mM Tris,150mM NaCl)，最後将处理好的sample以USCN collagen type I ELISA kit进行测试。 : 可是一直测不到～陆续査了许多不同protocol ，有些提到要再用pancreatic Elastase处理并用硫酸铵沈淀。 : 也看过其他kit，前处理sample的方法大致与上述雷同。（当初是因为懒惰，看到USCN没有标明任何需要sample前处理的步骤，觉得好像很方便就买了…） : 希望版上各位前辈能拨冗传授我一些该注意的事项～谢谢！！ : : By 好想测到collagen的人 : : P.s.手机排版有点失控，辛苦各位了～感谢耐心看完～ : : : -- :

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) : ◆ From: 42.70.62.200 : 推 dddd77915:我也正在测，但还在想要用哪个方法。如果是买ELISA是否 11/18 11:29 : → dddd77915:有标准protocol 可以参照?你用哪家哪个货号的? 11/18 11:30 : → haaaaaa:我目前是用MDbioproduct的kit(M036007)，我follow它的 12/25 14:30 : → haaaaaa:protocol抽出collagen，测定时顺便测前处理有用到的 12/25 14:31 : → haaaaaa:solution(acetic acid和TBS)结果前者有matrix effect~ 12/25 14:32 : → haaaaaa:我觉得很怪~不知道有没有人用这个kit成功测得过耶~感谢!! 12/25 14:32 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.4.199