作者mars52013146 (疯狂恰吉)
看板Biotech
标题[求救] 小鼠组织抽RNA都抽不到
时间Thu Feb 13 13:25:44 2014
我拿小鼠肌肉组织来抽RNA过程如下
将组织放置研钵(已放在冰上并用液态氮冰过)压碎後加入trizol 1ml
研磨到trizol回复到液状蒐集到离心管加入200uL chloroform 10min
离心(低温) 15min取上清液
加入等量isopropanol後室温作用30min
离心(低温) 15min吸掉上清液
加入1ml 75%酒精(DEPEC 水配置) wash pellet(只有冲起来没有打散)
离心(低温)後放室温15min dry
用DEPEC水回溶50uL
我的问题是
1.我测RNA浓度 280/260比值介在1.6~1.7而260/230却只有0.5...
我询问抽过RNA的学长他说260/230要在1.5以上才好
2.我的组织已经放在-80冰箱半年这样会有影响吗??
我抽了3.4次了没一次成功....T^T
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◆ From: 120.107.58.150
1F：→ roy047:260/230过低应该是吸到chloroform? 02/13 13:52
2F：→ mars52013146:我抽RNA浓度只有50ng/uL左右,最多才117ng/uL 02/13 13:52
3F：→ mars52013146:可是我没有吸到最底还有残留液体在分层那阶段耶 02/13 13:53
4F：→ Ianthegood:+CHLOROFORM後的离心不要在低温做试试看 02/13 14:16
5F：→ mars52013146:我加入chloroform是室温作用10分钟在低温离心 02/13 14:32
6F：推 HEK293:磨完我会给他一次forzen-thaw cycle才做後续extraction 02/13 14:32
7F：→ mars52013146:喔~我看懂你的意思了,误会误会抱歉 02/13 14:32
8F：→ mars52013146:h大的意思是再加入液态氮在冷冻一次在磨一次的意思 02/13 14:34
9F：→ Ianthegood:加chloroform之後有没有摇阿? 02/13 14:35
10F：→ mars52013146:有,只有上下摇几下没有vortex 02/13 14:38
11F：→ huuban:抽完再酒精沉淀一次？ 02/13 19:59
12F：推 rebirth:你的问题是抽不到RNA，还是抽得到但是纯度差？ 02/13 21:06
13F：推 reinherd:建议google Qiagen Fibrous Tissue RNA extration kit 02/14 04:48
14F：→ reinherd:肌肉这种fibrous tissue不容易取RNA 02/14 04:48
15F：推 patrickkuan:肌肉ＲＮＡ少,建议提高组织量 02/16 11:41