作者chenmick ()
看板Biotech
标题[求救] LNCap一pass就死一半
时间Mon Mar 3 14:26:15 2014
小弟最近开始接触LNCap这个细胞株(购自食品所)
上网爬文又自己养了一阵子觉得还真的不好养@@
买来刚解完贴得超漂亮,但pass细胞後就长不好了
我已经知道这个细胞株容易飘,但不晓得为什麽每次pass细胞就死了3~4成
在显微镜底下观察到许多疑似死细胞的黑色无光线折射残骸
(也亮亮一坨坨飘在medium,但有人说是活细胞!?)
我试过以versene和trypsin处理细胞,结果都差不多
Medium配方(参考食品所):Sigma RPMI-1640 (Product No. R6504)(已含2mM L-glutamine),
NaHCO3 2g/L, HEPES 2.98g/L, D-Glucose 4.5g/L(有再外加补到final conc.),
Sodium pyruvate 1mM, 10% FBs, 1% P/S抗生素
请问这样的medium可以吗?
把LNCap打下来可以pipetting吗?力道又是如何呢?
感谢!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.48.9
1F：推 honey823:这个细胞真的比较容易飘起来, seeding後请让它贴附生长 03/03 15:16
2F：→ honey823:至少24小时之後再去做实验会好一点, 贴附的话, Corning有 03/03 15:17
3F：→ honey823:出一款cellbind的dish, 用来养这类型的细胞, 还不错用 03/03 15:17
4F：→ honey823:medium的话应该没太大问题, 我也用一样的配方 (其实配方 03/03 15:18
5F：→ honey823:ATCC或者食科所都差不多), 我的medium是用Gibco liquid的 03/03 15:19
6F：→ honey823:打下来的话, 我是用trypsin 3~5分钟, 其实PBS冲也会下来 03/03 15:19
7F：→ honey823:没碰过死的这麽惨的问题, 要不要check一下CO2培养箱的 03/03 15:20
8F：→ honey823:CO2浓度? 以前用过Thermo可以灭菌的培养箱, 曾经发现灭菌 03/03 15:21
9F：推 honey823:後或者使用久了之後, CO2的浓度会跑掉, 以上为个人经验. 03/03 15:23
感谢~ 我细胞pass完第二天才赶动它
细胞是用corning一般的dish(Standard Tissue Culture Treated)
请问coat poly lysine可以吗?
thx~
※ 编辑: chenmick 来自: 203.64.48.9 (03/04 12:44)