作者tabosin (tabo)
看板Biotech
标题[求救] G418 stable clone
时间Fri Mar 14 19:49:26 2014
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让，
请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
目前实验正在挑stable clone 药筛是用G418 800microgram/microliter
可是细胞在第5天才开始死亡 死亡的很慢 而且细胞数很多 几乎到第三层了
因为当初transfection 怕转不进去 转了两次 细胞就变那麽多了QAQQQQQ
现在几乎还是全满的状态 只是细胞有飘比较多起来
当初做药量测试 细胞没那麽多 现在细胞数增多 加上他死得那麽慢
细胞会不会产生对G418的抗药性?
现在要筛1个礼拜 还可以增加G418的浓度吗?
请高手大大们指点~ 目前卡卡中QAQQQ
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.23.37.126
1F：推 qiet:你得把细胞弄下来分盘稀释让细胞慢慢分裂生长个几个礼拜 03/14 20:16
2F：→ tabosin:药筛一个礼拜了 可以分盘吗? 03/14 20:18
3F：→ chaunen:一直subculture吧 等transient效果退了 真正integrate 03/14 22:48
4F：→ chaunen:进到genome的极少部分细胞才会慢慢变多 03/14 22:49
5F：推 qiet:分盘稀释倍数高一点，之後每两到三天换medium让细胞分裂生长 03/14 23:16
6F：推 qiet:有integrate进genome的细胞才能存活下来，细胞太满根本无法 03/14 23:18
7F：→ qiet:生长，当然也不会被G418杀死阿～ 03/14 23:19
8F：推 elelith:你用的浓度到底是多少阿? 800ug/ml? 03/15 05:30
9F：→ ai760721:800ug/ul 有点惊人... 03/16 09:52
10F：推 tiffan1118:造他细胞的死亡速度 应该是ug/ml 他应该打错 03/16 11:41
11F：→ beingho:一点都不惊讶....我用25 mg/mL G418 竟然杀不死SW620 见鬼 05/23 11:43