※ 引述《hsuan7919 (阿头)》之铭言： : 小弟最近以HPLC将一个发酵产物分离出许多不同分子量的fraction : column:TSK G2000swxl (size exclusion chromatography) : mobile phase:KH2PO4 100 mM + 1M NaCl + 1mM EDTA : detector:UV : 之後将这些fraction拿去以LC-MS/MS监定各根fraction中可能存在的序列 : 再分析各根fraction中哪段序列的可信分数为最高 : 将这段选定序列，送去外面生技公司做胜肽合成 : 合成回来的peptide我拿去再以同样条件HPLC打一次 : 发现此peptide的RT，和我一开始以HPLC分离下来的fraction的RT不同(差很远) : 有想过是不是溶解度的问题 : 後来我也依照peptide性质以适合的有机溶剂溶解 : 但跑出来结果，和以水溶解没有差别== : 就分子筛column来说，就算某根fraction内可能的氨基酸序列有数条 : 那RT差一点点或许可以接受 : 但RT差有点多....我真的想不出是什麽原因造成的.... : 而且合成胜肽的peak的RT range也有点宽...不像是正常peak... : 附图在此https://www.dropbox.com/s/idn79zmeiuw6ro6/%E5%9C%96%E7%89%871.jpg : 再麻烦各位有经验的大大帮我解惑了!!!感恩~~ 一般peptide纯度会用Reverse phase C18 HPLC 监别,建议把原始收的peak与和成的 以RP HPLC分析一次 ，对照RT就可以确定差别 -- Sent from my Android --

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