作者godinal (无心)
看板Biotech
标题[求救] qPCR NTC相关问题
时间Mon Mar 24 17:37:29 2014
由於之前做qPCR其NTC都时有时无(我是用SYBR Green 系统)
上个星期配了一管12 reaction之 master mix(除了templete外其它都加)
分别放到不同的孔洞中
其中有七管NCT由qPCR看起来有amplify
跑agarose gel後发现其中有1管Ct=39在gel里没有band
还有一管Ct=25在agarose gel也看不到band
剩下5管NTC有讯号, 跑agarose gel後发现其NTC的band位置还不大一样
今天又同时配了10 reaction 之master mix
qPCR结果中还是有一半(5管)看起来有amplify
不知大家有没有碰过这种状况
NTC很不稳定，同时配只是分装都会有不一样结果
已经清过实验室，也换过实验地点，也有改用filter tip
连pipettement都拿去灭菌处理
实在想不出还有什麽方法可以让NTC稳定下来
不知大家有没有什麽建议
麻烦大家帮忙想想有什麽办法....感恩
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◆ From: 140.96.146.51
1F：推 huangsw:primer从以前就不稳吗？还是最近才开始, 拿管新的分装管 03/25 10:08
2F：→ godinal:最近才开始做..而且每次都是拿新的分装管 03/26 09:31
3F：推 huangsw:有没有考虑重新设计primer? 03/27 22:29