作者bear2926 (大能)
看板Biotech
标题[求救]蛋白质定量
时间Wed Apr 2 15:18:07 2014
请问大家，我最近在跑ＷＥＳＴＥＲＮ．
可是每次定量都不一致
使用ＢＳＡ去求Ｒ平方,以及BIO-RAD-PROTEIN蛋白试剂
配成400ul
总total取100ul放到96-well上去测ELISA
蛋白sample则取2ul和试剂398去混匀
也是取100ul
定量出来後去跑western，
每次的control和DMSO的表现量都会比其他下药的蛋白还要多
是使用coomassie blue去染色一小时而知道结果
每次定量完後，假如我要取２０ｕｇ的蛋白，每次都得取不一样量的ｕｌ数
取量甚至差距到一半
求解？是因为定量出问题 还是蛋白本身ＤＭＳＯ和ｃｏｎｔｒｏｌ就会表现比较多！？
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1F：→ Invec:利用96孔盘作蛋白质定量请参考台大bct第四章4.2节 04/02 18:16
2F：→ Invec:加入呈色剂後若时间拉的太长或间隔不一会造成定量误差 04/02 18:17
3F：→ bear2926:谢谢你喔 04/02 21:37
4F：推 dehydrogenas:拟定量的方法有问题 04/07 13:41
5F：→ bear2926:请问怡吓是我的步骤有问题还是手有问题，谢谢你喔 04/07 21:41
6F：推 qiet:有点看不懂... 不过如果你的实验组加的药会让细胞死亡 04/07 23:33
7F：→ qiet:蛋白质浓度相对於control/DMSO组别低是正常现象 04/07 23:33
8F：→ qiet:因为细胞加了要长的就比较少&比较不健康要死不活 04/07 23:34
9F：→ qiet: 药 04/07 23:34
10F：→ qiet:但定量要是准的话, 同样取20ug蛋白下去染色应该不会差太多 04/07 23:35
11F：→ qiet:除非细胞真的死的太惨, 04/07 23:35
12F：→ qiet:另外在配置跑胶的mixture时，取control由於浓度较加药组浓 04/07 23:36
13F：→ qiet:要避免pipet时carryover的现象，会造成浓度配出来不准确 04/07 23:38
14F：→ bear2926:谢谢，我养的是ｃｏｌｏ２０１，加药下去确实会使细胞死 04/08 10:01
15F：→ bear2926:我在收蛋白的时候 也有发现细胞飘起来很多 04/08 10:02
16F：→ bear2926:我也有把飘起来的细胞一起收蛋白 04/08 10:03
17F：推 dehydrogenas:步骤有问题 你可以写一下你用的dye名称吗 04/08 12:02
18F：→ bear2926:4X protein loudong dye 波仕特公司的 04/09 09:01
19F：→ dehydrogenas:你自己写的是Bio-Rad 然後又说是波仕特? 04/09 15:43
20F：→ dehydrogenas:BTW 是protein loading dye吧 XD 04/09 15:44
21F：→ bear2926:HAHA，BIO-RAD是定量时用的试剂。 04/10 15:45
22F：→ bear2926:波仕特是４Ｘ loading dye没错 一时打太快 哈哈哈 04/10 15:46
23F：推 allisa:细胞死太多也会影响到cytoskeleton 04/30 13:18