作者MDCCLXXVI (1776)
看板Biotech
标题[求救] PCR primer带有GGC重覆的序列
时间Thu Apr 17 18:57:36 2014
最近要在一段蛋白质前面加上GGGGS四重覆的linker
所以5' primer带有下面的序列:
ggcggcggcggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggcagc
但将PCR(用phusion polymerase,band很乾净)产物clone定序後，
发现在linker中的序列有deletion(少10几个mer)
因为不同clone的deletion都不一样，所以应该不是primer合错了
想过是不是GC-rich造成的二级结构所影响
所以打算用下面的方式试试看
1. 用phusion polymerase GC buffer for GC-rich template
或
2. 加DMSO
请问有人有类似的经验吗?
thx~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 203.64.48.9
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※ 编辑: MDCCLXXVI (203.64.48.9), 04/17/2014 19:03:08
1F：推 bluesnow1122:你可以两个同时做,不同浓度DMSO也可以试试3% or 5% 04/17 20:00
2F：→ blence:如果是在primer上面，为什麽会是PCR或polymerase的问题？ 04/18 02:45
3F：→ blence:或应该说,一般是template的GC-rich太多才用上述,而非primer 04/18 02:49
※ 编辑: MDCCLXXVI (203.64.48.9), 04/18/2014 10:09:11
4F：→ satasumi: DMSO或许可以有帮助,但有试过把重覆样品再定序一次吗? 09/29 01:33