作者NCKUM (成功大学医学)
看板Biotech
标题Re: [问题] 确认细胞上的receptor?
时间Sat Apr 19 03:34:06 2014
借这标题问个问题
最近有听到所上一位老师说
今天ligand如果已结合receptor 应该antibody会认不到
因为会构型改变(造成表现降低)或是下面被切断 可能造成比原本WB的位子还要低 像是egfr 我们曾经发现phospho-egfr增加 但total egfr降低
最近我也是碰到一些难题
我认知上cell line receptor本来就固定量
最近我做ELISA发现chemokine ligand有相对control增加10倍以上
但在WB看receptor反而减少
例CCR2 datasheet predict 42 KDa monorabbit
但在这位子我看到减少 反而看到35KDa增加
但我有拿positive control 是42KDa
请问35位子是否可能是cleavaged form(问过specialist他们不清楚)
学姐给我一个很妙答案 monoclone可以看到很多band应该被cleavaged 所以看35位子
我有用过confocal 去看 有增加 但WB 大家比较信
感谢
※ 引述《realism ()》之铭言:
: 我想确认某个细胞上是否真的有特定的receptor 不知道有哪些方式?
: 目前自己想到的是
: 1. QPCR去抓 (但是否会比较不准 因为不是直接去认cell表面?)
: 2. flow cytometry 去抓surface marker (不过我没做过 是不是
: 要去找有没有我要的protein的commercial的抗体? )
: 初学者的疑问 谢谢大家帮忙 >.<
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