※ 引述《NCKUM (成功大学医学)》之铭言： : 借这标题问个问题 : 最近有听到所上一位老师说 : 今天ligand如果已结合receptor 应该antibody会认不到 flow cytometry有可能会因为结构改变而认不到 western blot主要是辨认linear epitope应该不至於构型改变就认不到 : 因为会构型改变（造成表现降低）或是下面被切断 可能造成比原本WB的位子还要低 像是egfr 我们曾经发现phospho-egfr增加 但total egfr降低 : 最近我也是碰到一些难题 : 我认知上cell line receptor本来就固定量 没有喔 receptor的表现量是动态的 会受到很多因素而上升或下降 : 最近我做ELISA发现chemokine ligand有相对control增加10倍以上 : 但在WB看receptor反而减少 : 例CCR2 datasheet predict 42 KDa monorabbit : 但在这位子我看到减少 反而看到35KDa增加 : 但我有拿positive control 是42KDa : 请问35位子是否可能是cleavaged form(问过specialist他们不清楚） : 学姐给我一个很妙答案 monoclone可以看到很多band应该被cleavaged 所以看35位子 : 我有用过confocal 去看 有增加 但WB 大家比较信 cleavaged form alternative splicing都有可能 应该还要多做实验才能判断 : 感谢 : ※ 引述《realism ()》之铭言： : : 我想确认某个细胞上是否真的有特定的receptor 不知道有哪些方式? : : 目前自己想到的是 : : 1. QPCR去抓 (但是否会比较不准 因为不是直接去认cell表面?) : : 2. flow cytometry 去抓surface marker (不过我没做过 是不是 : : 要去找有没有我要的protein的commercial的抗体? ) : : 初学者的疑问 谢谢大家帮忙 >.< -- --

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