※ 引述《MDCCLXXVI (1776)》之铭言： : 最近要在一段蛋白质前面加上GGGGS四重覆的linker : 所以5' primer带有下面的序列: : ggcggcggcggcagcggcggcggcggcagcggcggcggcggcagc 这种 tandem repeats 在 PCR 或一般 DNA 复制本身就容易有 insertion/deletion 突变 所以我建议，既然你关心的只是 amino acid 序列， Glycine 可以有不同的 coding 方式，不要都用 ggc 这样就能避免 tandem repeats 造成的突变 : 但将PCR(用phusion polymerase,band很乾净)产物clone定序後， : 发现在linker中的序列有deletion(少10几个mer) : 因为不同clone的deletion都不一样，所以应该不是primer合错了 : 想过是不是GC-rich造成的二级结构所影响 : 所以打算用下面的方式试试看 : 1. 用phusion polymerase GC buffer for GC-rich template : 或 : 2. 加DMSO : 请问有人有类似的经验吗? : thx~ 这种 tandem repeats 的突变，跟点突变不同，不容易避免 加 GC buffer 可能会让 PCR 产量增加，但正确率不一定会提升 至少我们实验室做过 AC- repeats 序列的实验，加 GC buffer 影响不大 -- 也许有一天，我们会很有默契的知道， 该各自往人生的路走下去，尽管舍不得对方的陪伴。 又也许，那一天一直不会来到， 那我们就拥有童话般的结局──永远在一起了。 --

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