作者wei780314 (大屁股)
看板Biotech
标题[求救] 菌种监定 16S rDNA P不出来
时间Tue Apr 22 12:33:11 2014
小弟最近在要做乳酸菌菌种鉴定(四株菌)
前面已做过API 50 CHL套组监定过生化特性了
菌种监定皆为以前学长姐做过的菌种
两株为L. rhamnosus,另两株为L. plantrum
也确定他们都有成功(都一次就做好...
所以PRIMER就跟他们用同一组
但是怎麽也P不出来...
想说是不是PRIMER放太久也重新买了一批重跑
由於我们实验室不是专门做分生
所以也没对这领域专业的学长姐可以问
但老师要求得做到PCR後才能送定序...
手法问题我也将抽出的DNA测过分光做定量了
然後全程在冰上做 药剂也抽取完就马上换TIP
但是奇怪的是只要我P出来有条带的
他的负控(以无菌水当模板)也会跟着P出条带...
而另外两只plantrum就是乾乾净净
什麽条带都没有(这组负控没条带
想说是不是PRIMER问题
就重新配了一管新的跑出来结果还是一样
我真的不知道哪里出问题
方法都照着以前学长姐就是做不出来...
请问板上各位大大能帮我想想办法吗?
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1F：推 bluesnow1122:PCR的药剂换新的看看 操作的药品和耗材有污染 04/22 12:39
2F：→ wei780314:B大 可是另外两株菌也是用同一批药剂但是没条带 04/22 12:53
3F：→ wei780314:耗材也是用完就换,这样应该能排除掉药剂或耗材问题? 04/22 12:54
4F：→ bluesnow1122:不然换个水吧 negative有band就很奇怪 04/22 13:57
5F：→ bluesnow1122:我以前有遇过不同lab的无菌水一个会P出band一个没有 04/22 13:58
6F：推 payton103075:无菌水灭两次看看!! 另外这种不是通常跑colony PCR就 04/22 22:07
7F：→ payton103075:足够了?需要到抽DNA吗? 04/22 22:07
8F：推 jhjhs33504:聚合酶或buff.有换过吗？ 04/24 20:33
9F：推 gestapo:买个DEPC-treated 二次水做Negative control. 16S DNA很常 04/26 01:14
10F：→ gestapo:见於水中。 04/26 01:14