作者Virtualkay (何铠)
站内Biotech
标题[讨论] 有人使用过Takara LA polymerase吗?
时间Tue May 6 11:25:21 2014
小弟最近操作clone时，使用号称highly-fidelity的Takara LA pol.
但挑8个clone送定序後发现，许多都有point mutation，而且突变的点
都不一样，大多突变成G/C。 不晓得有没有人遇过类似的问题？
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1F：→ blence:先前用这支发现如果是cDNA约1~2k大的,不太会有mutation 05/06 12:41
2F：→ blence:反倒是拿plasmid量有10ng以上去PCR,连500bp也一直突变 05/06 12:43
3F：→ Ianthegood:clone的话是你的菌有问题吧 pol出问题的机率小 05/06 13:02
4F：→ xxtomnyxx:High Fidelity Polymerase 唯一推荐 Phusion！ 05/06 14:22
5F：→ xxtomnyxx:自己和实验室夥伴用过後都说赞wwwwww 05/06 14:23
6F：→ xxtomnyxx:好奇问一下你的 PCR template 来源是什麽？产物多大？ 05/06 14:24
7F：推 cort41:这只酵素 8年当硕士生时就在用了~~~~~~~~~~超烂 换KAPA吧 05/06 16:51
8F：推 jabari:给你一个combo.. 用Roche probemaster 再用 Roche HF 威 05/06 17:15
9F：推 bluesnow1122:Phusion蛮贵的但是很好用~XD 05/06 19:25
10F：推 chaunen:用KAPA的hifi P个2.3k都OK 试过1.3k 25+25cycle 也OK 05/07 13:51
11F：→ chaunen:微晶代理的样子 可以 A sample 05/07 13:52
12F：→ Virtualkay:blen或许我们的状况是类似的, 但我只做过这个cDNA 05/10 23:17
13F：→ Virtualkay:产物约300bp, template来源是plasmid(100ng->50X dilu) 05/10 23:18
14F：→ Virtualkay:所以大家共同的结论, 让我决定不再买Takara了.. 05/10 23:19
15F：推 jeol1620:推 pfu ULTRA II 怕太贵可以减量然後补 taq 05/13 22:47
16F：→ jeol1620:我们做突变或选殖 p 10K全质体都没问题 05/13 22:49