作者cdkcyclin (cdkcyclin)
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标题[讨论] protein-protein interaction研究方法
时间Mon May 12 06:51:19 2014
各位版友大家好，想请教一个关於研究protein-protein interaction的想法。
我的疑问是这样的，我推测A protein是一个hydroxylase，
然後我想知道A protein是否与EGFR相互结合(目前尚不论A是否hydroxylate EGFR)，
当然，最一开始的想法就是用IP来证明。
但从我的实验结果，我并没有看到A与EGFR的direct interaction，
反倒是当我用mutant A protein(将活性部位突变，使其失去活性)时，
才看到有EGFR的结合。
我不能否认此突变，也许反而造成A与EGFR的结合，但从另一个角度思考，是否因为A与
EGFR结合作用的反应相当快速，因此很难从wild type的A直接看到与EGFR的结合。若真是
如此，还有什麽其他的法法可以解决我的疑问呢?
我目前的想法是，第一，我不用突变的方式来抑制A的活性，因为这样也许会使其结构产
生改变，我改用hydroxylase inhibitor来处理细胞，将两者结合之後，抑制接下来的
hydroxylation。第二，直接做Mass spectrometry，侦测EGFR是否被hydroxylation。
如果有版友有类似的实验经验，希望可以给我一些意见，谢谢大家!!
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1F：推 skybreeze:想到的实验是yeast tw hybrid system 但我没做过 05/12 07:57
2F：推 ai760721:proximity ligation assay 05/12 09:42
3F：→ saviora:FRET 05/12 11:14
4F：→ Ianthegood:如果是hydroxylase的话 egfr上面应该要有能被反应的 05/12 11:54
5F：→ Ianthegood:aa吧 然後有可能从substrate来看吗? 05/12 11:56
6F：推 APPswe:Surface plasmon resonanceꀨSPR) 可以试看看 05/14 23:52
7F：推 jhjhs33504:要避免伪阳(阴)性问题~可能做Mass会比较清楚吧? 05/15 04:21
8F：推 gps0110:mass spec最直接 05/29 12:11