作者bear2926 (大能)
看板Biotech
标题[求救] western blot抗体问题
时间Thu May 15 09:51:11 2014
请问各位，这几次压片都没有结果。
抗体是用Santa cruz的,都存放於4度C冰箱
都用PBST配1:1000，压O/N
可是抗体是学姊留下来的，学姊大概一年前毕业吧
二抗也是用PBST配的，1:5000
每次去压的结果都颇丑．
p27和p21根本没出现过...只有出现actin
而且actin也不在43这个位置上....
想询问一下各位怎麽解决...换抗体吗还是要用脱脂牛奶去配抗体?
实验室没半个学长姐超级囧欸...
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1F：→ ai760721:一般不是都会用blocking去稀释吗? 05/15 11:55
2F：→ xxtomnyxx:blocking 用什麽，抗体就用什麽去稀释 05/15 13:26
3F：推 jsi:看起来抗体配制没甚麽问题。actin的图和曝光时间可提供一下吗? 05/15 17:56
4F：→ jsi:说不定是protein量太少所导致。 05/15 17:57
5F：→ jsi:直接问毕业学姐会比较快，若她压的讯号都很好，比对你们之间 05/15 18:02
6F：→ jsi:作法差异就知道啦! 05/15 18:03
7F：→ iceking:连自己try条件都没try过就上来问,也没附图,我们也很囧欸~ 05/16 00:21
8F：→ ko363630:ECL效果不是顶多才半小时? o/n没差吧 05/16 01:50
10F：→ bear2926:这个是第一次有压出来的actin 05/16 13:32
12F：→ bear2926:这个是後来压的，可是不在43那条位置上... 05/16 13:34
13F：→ bear2926:可是p21和p27都压不出来欸.... 05/16 13:35
14F：→ bear2926:如果一抗用牛奶稀释...这样不是不好保存? 05/16 13:36
15F：→ blence:看背景感觉讯号像是调过，如果是这样p27跟p21看不到也合理 05/16 14:26
16F：→ blence:而且你要看p21,p27,应该知道这两个不见得在所有细胞都明显 05/16 14:27
17F：推 iceking:用牛奶稀释放1~2个礼拜没问题，1抗不要用PBST,用PBS milk 05/16 16:06
18F：→ iceking:稀释看看 05/16 16:06
19F：→ bear2926:好，我今天试看看...因为我怕用牛奶稀释不能一直reuse 05/19 11:10