作者yawenchou (yawenchou)
看板Biotech
标题[求救] 关於PCR的问题
时间Sat May 24 13:16:41 2014
我到实验室之後接手了一种KO mice,
之前学姊在处理这种老鼠的genotype监定上就常常出现问题,
到我手上也是只要当genomic DNA浓度一不在范围内就会跑不出来,
甚至就连当要load sample的胶放进去1X TBE里面, 只要盖过胶就有可能跑不出来,
最扯的就是当sample一多换成小齿梳, 就更有可能跑不出来;
今天又出现了我无法处理的状况,
明明prositive control我已经做出好几次是heterozygous的结果,
但是今天一整个翻盘耶=_= 为了避免又smear,
我用了两组positive control,
结果一组在WT的地方没东西, MU的地方却有东西,
第二组却都有跑出来, 而且band都很清楚,
我想请问这到底是什麽问题?!
我觉得我已经快要被这种transgenic mice给搞疯了-..-
每次genotyping都要拖好久, 从来没有爽快结束过FK,
我曾想过会不会是primer stock浓度出现问题所以才造成这种结果......
因为之前有一阵子WT就是死都跑不出来=_=
请问有人有类似经验吗?
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1F：推 jabari:1. dna浓度很有关系 2.换个taq 3.回查mating历史 05/24 15:30
2F：推 jabari:我觉得这pcr应该还没最佳化..多试试条件吧 05/24 15:32
3F：→ jabari:除了pcr以外..用probe作snp genotype也可考虑 05/24 15:33
4F：推 lilyj:请问是wt, ko, reverse三个primer一起跑吗？如果是的话， 05/24 16:20
5F：推 lilyj:可以试着分开跑，我有遇过wt ko primer会竞争的情况 05/24 16:22
6F：推 as862437:换成小齿梳 loading dna总量一样吗?浓度太低会很暗 05/25 00:40