作者coooo77 (RabiCat)
看板Biotech
标题[求救] 粒线体难以观察
时间Sun May 25 18:17:03 2014
各位前辈好，第一次在这边发文，若有冒犯请多多包涵
小弟目前实验要将有绿萤光蛋白(GFP)标定的粒线体注射到SD Rat的脊椎腔(spinal cord)
与坐骨神经(sciatic nerve)中观察。老鼠牺牲後包埋切片，用萤光抗体针对GFP染色。
目前困扰的地方是由於粒线体实在太小，无法分辨说哪个部分确实是注射的粒线体；此
外显微镜最高也只能放大400倍；另外一开始使用绿萤光二抗去观察粒线体，结果发现
神经组织中也会自己发出绿光，所以换了红萤光二抗观察，但结果跟使用绿色萤光二抗
效果差不多，检体上面都是一点一点的萤光(星光闪闪的样子)。
目前想说是否在注射粒线体前用MitoTracer标定，但仔细想想原本的粒线体已经
有GFP了，再标定感觉很多余。此外我待的实验室也没人用过MitoTracer。
查了biotech版上也没有查到类似的问题，故上来提问，恳请赐教，谢谢!
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1F：→ fatstan:Confocal?? 05/25 20:25
2F：→ Ianthegood:换二抗也有? 一抗专一性不够? 05/26 00:12
5F：→ coooo77:型号是 Olympus BX40 05/26 10:53
6F：→ fatstan:我的意思是 用confocal去拍会比较清楚 05/27 11:18
7F：→ coooo77:confocal在我的实验室是公用仪器,使用的话要一个月前预约 05/27 20:40
8F：→ coooo77:使用上会比较不方便 故想找比较简便的方法 毕竟有很多检体 05/27 20:41
9F：→ coooo77:要拍照 05/27 20:42
10F：→ fatstan:我有个疑问 为什麽你一开始用GFP标定粒线体 05/28 11:12
11F：→ fatstan:後来又要用抗体侦测GFP GFP本身就会发光吧 感觉怪怪的 05/28 11:15
12F：→ fatstan:换个不会发光的Tag是不是比较好?? 05/28 11:18
13F：→ fatstan:有试过切片後直接拍吗?? 05/28 11:46
14F：→ coooo77:首先,标定的粒线体是跟合作的实验室拿的,有红光绿光两种; 05/29 00:14
15F：→ coooo77:接着切片後直接观察也有做过,但发现组织本身就会发绿光.目 05/29 00:16
16F：→ coooo77:前打算换成红光粒线体或染BrdU标定看看. 05/29 00:20
17F：→ fatstan:我认为Confocal还是预约比较好 找有经验的人帮你会比较快 05/29 09:12
18F：推 fatstan:用ㄧ般的萤光显微镜拍很容易因为萤光太强而干扰实验 05/29 09:16
19F：→ fatstan:在预约到之前 你可以试试你说的那些 05/29 09:18
20F：→ coooo77:谢谢前辈的建议 我会先试试看前辈讲的方法,如果有进展再 05/29 10:15
21F：→ coooo77:来推文 05/29 10:16