大家好，我的实验是要用QPCR作环境中细菌的定量分析 使用的reagents是Roche Master 480，probe是TaqMan probe 使用标准品检测扩增曲线的配置浓度为10^7~10^0 前几次做实验的时候都没有什麽太大的问题 後来上机的时候都发现在10^5与10^4的Ct值很相近， 10^5Ct是24的话10^4就会是25 後来与厂商讨论之後， 他们建议我固定每一次标准品dilution的vortex及spin down的时间 并且增加稀释的体积! 後来我的操作流程是固定vortex五秒，spin down十秒 取10 microliter稀释成下一个浓度 後来情况也都没有改善，但最近在做的时候发现10^4~10^3之间出现上述相同的问题 而10^5~10^4变正常了... 请问大家知道可能是有什麽问题导致这样的结果吗? 还是是我pipet操作的问题比较大 感谢大家><" --

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