大家好 我们实验室想要证明我们的纯化技术良好 因此想要利用电子显微镜的方式观看病毒颗粒 但是结果一直不太漂亮 颗粒的纯化是先利用超高速离心沉淀後 再利用非连续蔗糖梯度分离 并用西方点墨法分析哪些部分有病毒颗粒存在 负染的部分 利用镀膜的铜片将病毒颗粒吸附後 染醋酸铀结束後乾燥就上机 病毒颗粒不明显就算了 背景也很容易有脏污 我们做的是Epstein-Barr virus 别人做的负染也是看起来烂烂的 所以放弃.... 包埋超薄切片的部分 我们利用抗体+Agarose beads先将病毒颗粒沉淀 然後一起脱水与包埋後切片 切下来的片子再利用抗体进行标定 得到的结果较满意 但病毒的浓度让人不满意 因为太少 所以老板也就质疑....一直说不像= = 考虑到抗体-病毒的作用会损失不少的病毒颗粒 所以我想更改固定病毒pellet的方法 我有看过有人利用Low-melting agarose进行样本的包埋後再进行电显脱水包埋与切片 目前我的想法是得到病毒的pellet以後 加入 10~20 lambda的 2% low-melting agarose将样本固定在底部 之後再进行样本固定与脱水等电显步骤 应该能有效提高病毒颗粒的浓度 会让切片比较好切到目标 但这种方法的示范影片是固定植物的根还有线虫 不知道是否有人听说过用来做病毒颗粒或细胞? 如果有人有做过类似的实验也请分享经验> < -- --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 1.160.112.140 ※ 文章网址: http://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1403214378.A.F4A.html ※ 编辑: joseph103331 (1.160.112.140), 06/20/2014 05:48:31