作者EDONIS (ED)
看板Biotech
标题[求救] 膜蛋白用一般SDS PAGE跑
时间Tue Jul 1 04:32:19 2014
正常养菌过夜,5ml的菌液IPTG诱导表现後,直接波音波破菌约5分钟,
打一秒停一秒,後以10000 rpm於4℃离心15分钟,用300μl PBS回溶
拿30~50ul跑SDS PAGE,跑出来可以看出有表现!!该怎麽解释??
一般膜蛋白有可能这样就出现吗??序列分析出是GPI-AP!!
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1F:推 biingru:10000转离心15分就有膜蛋白真的有点神 07/01 09:29
2F:推 tsubasawolfy:不是用IPTG去induction了?还是你觉得这东西会出现在 07/01 09:51
3F:→ tsubasawolfy:细菌表面? 07/01 09:51
4F:→ KittyGod:膜蛋白应该要特别去分层才会分得开 一般操作都是混在一起 07/01 11:29
5F:→ storm780121:inclusion body? 不过应该不溶PBS才是 07/02 14:18
6F:推 leoblack:膜蛋白因为transmembrane部分是疏水性,所以需要detergent 07/02 16:41
7F:推 leoblack:帮助才能从inclusion body中拉出,不然会全卡在well上 07/02 17:10
8F:→ leoblack:至於要哪种detergent则要试 07/02 17:10
9F:推 abcm1042:用波音波应该也打不出 你应该也需要detergent SLS? 07/02 17:26
10F:推 leoblack:之前看学姐做是用microfluidizer破菌的 07/02 19:18
11F:推 silverberry:上清液有跑吗? 如果没意外的话上清应该也会压到 band 07/09 09:59
12F:推 silverberry:如果没有的话,那 PBS 回溶的那部分是 inclusion body 07/09 10:15
13F:→ silverberry:的机会比较高。 07/09 10:15