作者EDONIS (ED)
看板Biotech
标题[求救] 膜蛋白用一般SDS PAGE跑
时间Tue Jul 1 04:32:19 2014
正常养菌过夜，5ml的菌液IPTG诱导表现後，直接波音波破菌约5分钟，
打一秒停一秒，後以10000 rpm於4℃离心15分钟，用300μl PBS回溶
拿30~50ul跑SDS PAGE，跑出来可以看出有表现!!该怎麽解释??
一般膜蛋白有可能这样就出现吗??序列分析出是GPI-AP!!
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1F：推 biingru:10000转离心15分就有膜蛋白真的有点神 07/01 09:29
2F：推 tsubasawolfy:不是用IPTG去induction了?还是你觉得这东西会出现在 07/01 09:51
3F：→ tsubasawolfy:细菌表面? 07/01 09:51
4F：→ KittyGod:膜蛋白应该要特别去分层才会分得开 一般操作都是混在一起 07/01 11:29
5F：→ storm780121:inclusion body? 不过应该不溶PBS才是 07/02 14:18
6F：推 leoblack:膜蛋白因为transmembrane部分是疏水性,所以需要detergent 07/02 16:41
7F：推 leoblack:帮助才能从inclusion body中拉出,不然会全卡在well上 07/02 17:10
8F：→ leoblack:至於要哪种detergent则要试 07/02 17:10
9F：推 abcm1042:用波音波应该也打不出 你应该也需要detergent SLS? 07/02 17:26
10F：推 leoblack:之前看学姐做是用microfluidizer破菌的 07/02 19:18
11F：推 silverberry:上清液有跑吗? 如果没意外的话上清应该也会压到 band 07/09 09:59
12F：推 silverberry:如果没有的话，那 PBS 回溶的那部分是 inclusion body 07/09 10:15
13F：→ silverberry:的机会比较高。 07/09 10:15