作者hahabighan (海绵饱涵 吃不饱)
看板Biotech
标题[问题] western blot 跑胶疑问
时间Mon Aug 11 15:22:44 2014
最近开始做western遇到很多小疑问
因为新的实验室学长说的方法跟我以往做的方法有所差异
所以想问问大家学长说的是对的吗?
1. 蛋白收完(溶於sample buffer中)只要在第一次使用时加热
之後跑胶前就不用在加热了
因为SB中有某些物质可以使蛋白维持一级结构
2. 为了防止蛋白在load入well後漂走所以一开始电压要开大一点
学长都是 上胶 200V 下胶 100V
请大家为我解答一下 感恩~
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.114.95.154
※ 文章网址: http://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1407741770.A.E6D.html
1F：→ milkpa: 1.看配方2.我的经验是相反，200V跑stacking不怕没对齐？ 08/11 15:32
2F：→ roy047: 2.相反+1, 到resolving下胶时才能加速... 08/11 16:13
3F：→ roy047: 1.的话是SDS会附在蛋白上 08/11 16:14
4F：→ blence: 1.可参考你们的protein marker使用说明,为什麽-20拿出来 08/11 17:16
5F：→ blence: 要先热一下;2.protein会飘走,是他的sample buffer配方有误 08/11 17:20
6F：→ Ianthegood: 1应该是指DTT 但是这东西会慢慢被空气degrade 08/11 19:57
7F：→ wanderchang: 同1f 08/11 20:51
8F：推 greenwind: Protein marker上注明不需再加热…… 08/12 09:34
9F：推 gps0110: 2相反 08/12 15:37
10F：推 ringohare: 2相反 08/12 20:37
11F：推 westterry170: 2相反+1 08/19 10:30
12F：推 mars52013146: 2相反+1 08/27 12:24