作者tynse71864 (tomosuke)
看板Biotech
标题[求救] DNA 跑胶 capacity
时间Tue Aug 12 13:16:17 2014
想请问一下
一般 Agarose gel (1%) 小片胶 (6个well)
跑多少sample最适当呢?
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我要做DNA recombination
其中的insert 来源是用maxi-prep的plasmid
(切2刀後会有5000+500的band)
跑RE digestion(total volume 25ul) 後
加入loading dye (6.25ul ，所以整管体积会有32ul左右)
我是直接把整管加进6 well 的小胶跑
上面5000多的band则是很胖(大概从1kb marker 4000~6000的宽度)
500bp则是不太明显 或很淡
之後跑gel extraction产量也很低
我一直以为是enzyme没切好/坏掉/东方神秘力量
今天跟老师讨论才知道跑胶有capacity这件事
那请问一般6 well的gel大概多少DNA去跑会比较适当呢?
(之前老师有说 把3个well挖在一起跑
我当初单纯以为只是怕sample会满出来.....
谢谢~
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1F：→ blence: total volume 25ul含多少plasmid？ 08/12 13:23
2F：→ blence: 看不懂所谓well capacity指的是DNA总量,或sample体积 08/12 13:25
3F：→ supray: 0.5K会看起来比5K淡是正常的,相同莫耳数下 质量比约 10:1 08/12 13:28
4F：→ supray: 6 well的total量下到 1~2ug 都还OK 08/12 13:29
5F：→ tynse71864: 2 /25 08/12 13:36
6F：→ tynse71864: 我想问DNA可load的总量 08/12 13:39
7F：→ tynse71864: 太多resolution会不好吧？ 08/12 13:39
8F：→ tynse71864: 但不知多少比较好 08/12 13:39
9F：→ supray: 如果你切了2ug DNA全部跑下去,你大概能回收150ng~200ng的 08/12 13:41
10F：→ supray: 500bp DNA 08/12 13:41
11F：→ KittyGod: 5000bp的亮度>500bp很正常啊 08/12 14:50
12F：→ soom: well的容积可以自己用尺量并计算得知，也跟胶的厚度相关 08/12 15:29
13F：→ soom: 咦?我看错了，不要理我 (另，2ug/well 应该不会有什麽问题) 08/12 15:33
14F：→ tynse71864: 我知道5000会亮很多 但我5000上面 （超过 marker 10kb 08/12 16:28
15F：→ tynse71864: 还有奇怪的杂band 08/12 16:28