如标题! (文长 慎入!!!) 我在做大肠杆菌表现Agouti 培养至OD=0.6~0.8加入IPTG刺激三小时 每一小时收一次 pellet加入1X dye打破後进行跑胶(15%)确认其表现 http://ppt.cc/Nrn4 如上图 确认表现後 进行粗分 将所有表现後菌液离心 pellet加入Lysis Buffer打破(0.03g/ml) in ice 1hr 离心後sup保留 pellet加入0.3M Urea Wash Buffer 以均质器研磨10下 离心後sup保留 pellet加入0.3M Urea Wash Buffer 以均质器研磨10下 离心後sup保留 pellet加入4M Urea Wash Buffer(无Trition X-100) 以均质器研磨10下 离心後sup保留 pellet加入4M Urea Wash Buffer 以均质器研磨10下 静置30min 离心後sup保留 pellet加入8M Urea Wash Buffer 以均质器研磨10下 之後进行跑胶(15%)就开始见鬼了... http://ppt.cc/P8xn 上图为最严重的时期 所有东西都看不见 只看见鹿角 http://ppt.cc/Hrt2 上图是轻微鹿角... 我有拍下跑胶过程http://ppt.cc/s5Gt 看起来一进入下胶就开始长鹿角 因为鹿角关系 一直无法进行细分 卡在这里许久 溶液配方 Lysis Buffer 50mM Tris.cl pH7.5 10% Glycerol 10mM Trition X-100 Urea Wash Buffer 100mM Tris.cl pH7.0 5mM EDTA 5mM DTT 2% Trition X-100 0.3,4,8M Urea 之後老师有下来帮我找问题 因为他也从来没看过 先排除胶的问题(因为实验室其他同学跑胶完全没异状) 我们怀疑是Trition X-100的问题 因为在没有Trition X-100 Urea Wash Buffer步骤 并没有鹿角 换了两个牌子 还是有一样的问题 之後我就先去做别的实验 在完全没有Trition X-100的实验中 鹿角又出现了... 我是不是跟SDS PAGE 不合啊!!! 文长...谢谢各位的耐心观看 不知道各位有没有碰过鹿角 有没有解决方法 --

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