版上各位大大好 最近小弟在做国科会的大专生计划 实验的一个重要部分是要测mice oxytocin conc. 最近在做ELISA时遇到一些疑惑 看protocol有些看不懂 / 版上爬过文 想询问有做ELISA实验的大家 协助我解惑 谢谢 1.关於Recovery 跟 Dilutional Linearity的意思 我使用的是Enzo 的 OXT ELISA kit protocol 在这里 http://ppt.cc/ftaT 想询问厂商做了这些recovery跟linearity test数据是给予参考用的吗 还是我需要在做实验之前也做份针对自己serum sample的吗? 2.Recommended dulition kit说明书尾列出了建议的dilution 其中关於serum是 1:8 我依此建议做了数次实验後 得出的值也都在standard surve的有效范围中 然而做完我有个疑惑:要将浓度值回乘8倍吗? (之前做没稀释的sample全都在curve外) 以及是否要做校正找出我的sample适合怎样的稀释倍率呢?(有这样的test吗) 3.关於sample的做法 我以会采全血的方式蒐集 过程中会加EDTA然後再离心取上清 在储存到-80度一个月内做ELISA 但看protocol说到EDTA可能干扰conjugate (chelator的关系) 是否有可以不需要用到EDTA的方法呢? 看到前几篇文提到放在室内自然凝血 这方法是指我抽完後直接放在那等到凝固再离心取上清吗? (想问这样的话会不会影响到oxytocin) 以上几个疑惑 希望有做过相关的人可以给些建议 或操作的经验分享 非常感谢~ --

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