作者shinchenboy (欣承男孩)
看板Biotech
标题[求救] 冻MCF10A细胞
时间Sat Sep 6 13:37:57 2014
想要询问有关冻MCF10A细胞的问题
是这样的
前几天我把之前我冻的MCF10A细胞从液态氮拿出来解冻
结果隔天发现细胞几乎飘起来.........
而我之前也有用相同的方法解冻MCF10A细胞(这批不是我冻的)
隔天看细胞生长的状况很良好
所以想必大概是我冻细胞的过程哪里出了问题
我冻MCF10细胞的流程如下
细胞用PBS wash後 用trypsin打下来
等待10min左右後
接着用medium(两倍trpsin量)来终止反应
然後离心(600 rcf 5min)
然後开始配置冻细胞的medium
比例如下 medium:DMSO = 9:1(细胞大约冻1/3 10cm dish的量)
总共是1ml
最後我把冻细胞的管放进渐冻盒 放进-80度冰箱
隔天再把细胞移置液态氮筒中
流程差不多是这样 结果解冻後细胞都飘起来了
不晓得版上有没有高手可以解除小弟的困扰
谢谢~
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1F：推 ko363630: Trypsin太久了，改用FBS:DMSO 09/06 15:29
2F：推 gps0110: 加FBS 09/06 18:25
3F：推 moon0126: trypsin 作用太久了，可以试7%DMSO 09/06 23:42
4F：→ yuyumom: 配DMSO冻液的时候有先让他放热完再用吗?? 09/07 09:44
5F：推 leptoneta: 你没放-20半小时就直接放进-80? 09/08 00:40
6F：→ leptoneta: 而且要加至少5%的血清 09/08 00:42
7F：→ utadalove: 有渐冻盒,可以直接放-80 09/08 12:42
8F：推 j2g014: 10min 太久罗！！ 09/08 15:16
9F：推 mesenchymal: 虽然要看trypsin浓度，但MCF10A本来就需要比较长时 09/08 20:58
10F：→ mesenchymal: 间的trypsinization,10-15min都是正常范围 09/08 20:58
11F：推 mesenchymal: 建议看一下ATCC的protocol 09/08 21:00
13F：→ grox: 照做一次看看吧 09/09 10:40
14F：推 stormcorn: DMSO冻液可以放在冰降温 09/09 15:04
15F：→ hsinhsien: 我不会让trypsin作用到10分钟耶!! 09/13 16:09
16F：→ chvkimo: trypsin 还是要看浓度决定时间, 渐冻盒有先回温到室温 ? 09/16 00:03
17F：→ chvkimo: 冻细胞的DMSO 7~10% 应该都可以, 但是我都是用含10%的FBS 09/16 00:05
18F：→ chvkimo: medium 在加 DMSO後,先插冰上预冷,因为DMSO加到medium中 09/16 00:06
19F：→ chvkimo: 会放热,可能会先把细胞伤害到 09/16 00:06