作者polomi (polomi)
看板Biotech
标题[求救] gene knockout on E. coli Chromosome
时间Sun Sep 7 15:41:40 2014
主要是想研究在E. coli上的某个特殊蛋白，
而需要先将选定的E. coli上 Chromosome做knockout的动作，
之後再做point mutation後，
用plasmid 送回去表现，
并做生化相关的实验观察变化。
目前主要是卡在第一阶段上对E. coli上的knockout上，
以前只有念过相关原理，
但从没有做过这类的实验。
我有参考一些资料和一篇论文，
http://ppt.cc/pvFb
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10829079
也有找到一些相关的KIT网页，
http://ppt.cc/uEIq
http://ppt.cc/auBu
因为我是我们实验室第一次做这个实验的方法，
想请问有没有人有做过相同的基因剃除实验，
有没有推荐的KIT组，
或是操作方法的变化，
或是实验上要注意的细节提醒。
感谢大家了。
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1F：→ Ianthegood: 做下去就知道了 细菌比真核好做很多 09/08 01:21
2F：→ Invec: 带抗生素KO的片段PCR後要做挖胶 如直接把产物作clean up 09/08 03:29
3F：→ Invec: 之後你再转进E.coli的时候会连原本带抗生素的质体都转进去 09/08 03:29
4F：→ polomi: 抱歉 主要是想请问有没有愿意分享protocol或是推荐的KIT 09/08 09:52