作者Dusha (Dusha)
看板Biotech
标题[求救] 合成两条单股DNA再Annealing
时间Wed Sep 17 17:52:57 2014
最近需要在construct中加入一段短序列
此序列前後加上RE切位後约有五十几bp长
由於从国外订plasmid较为昂贵
计算过後 想到 也许可以 合成两股互补的很长的单股primer
再自行anneal起来便成一段双股DNA RE切完塞到我要的vector
应该是比较方便和便宜的方法
想请问版上有没有人曾经这样做过的? 成功率高吗?
有没有什麽实验细节需要注意呢?
谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.114.96.229
※ 文章网址: http://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1410947580.A.0CD.html
1F：→ roy047: primer应该可以设计成annealing後直接有overhang, 不用RE 09/17 18:36
喔喔! 感谢你~
※ 编辑: Dusha (140.114.96.229), 09/17/2014 18:59:55
2F：→ Ianthegood: 做过啊 还做过再长一点用三段oligo来做pcr的XD 09/17 20:50
3F：→ williamyang: 成功率非常高,之前都是用这方法做shRNA cloning 09/17 20:59
4F：→ williamyang: 中研院RNAi core有protocol可以参考 09/17 21:00
5F：→ blence: 短片段序列都这样接,除了overhang,5'端加磷酸修饰比较好 09/17 23:19
6F：推 mesenchymal: 5'phosphorylation & annealing of oligos 09/17 23:25
8F：推 tsubasawolfy: 互补的就直接慢慢降温就好了 很简单 09/17 23:33
9F：推 jeol1620: 做过用两条反相primer直接塞66个bp的片段，一次pcr就 09/18 08:47
10F：→ jeol1620: 进去了 09/18 08:48
好的 谢谢各位!
※ 编辑: Dusha (140.114.96.229), 09/18/2014 12:28:28
11F：推 sdshow: 放沸水内10分钟，然後整盆水连同你的dna移至室温慢慢降温 10/01 19:36