作者LIAR (玻璃做的大叔)
看板Biotech
标题[讨论] SDS-PAGE有可能denature不完全吗？
时间Sun Sep 21 19:57:03 2014
我用的western是denatured的，sample buffer的SDS是1%，最近跑TGFβ2发现50kD
有表现以外，100kD附近也有很强的讯号。
由於抗体是polyclone，当然无法排除认错，不过考虑分子量和强度，附近又很乾净，
我有点怀疑是dimer。
不过我不懂的是既然已经用过SDS和β-me，请问这样dimer有可能解不开吗？
dimer应该算第四级结构吧？可是SDS和β-me不是可以解到1级结构吗？
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起初，他们追杀共产主义者，我没有说话，因为我不是共产主义者；
接着，他们追杀犹太人，我没有说话，因为我不是犹太人；
後来，他们追杀工会成员，我没有说话，因为我不是工会成员；
此後，他们追杀天主教徒，我没有说话，因为我是新教教徒；
最後，他们奔我而来，却再也没有人站起来为我说话了。
《First They Came（他们首次来时）》，Martin Niemoller牧师（1892-1984）
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1F：→ caesar0926: 这种情况我们实验室通常看预期分子量的band就好 09/21 21:49
2F：→ caesar0926: polyclone的通常会有较多的杂band 09/21 21:50
3F：→ caesar0926: 如果dimer是公价键结才有可能不会被解开 09/21 21:50
4F：→ caesar0926: 但若没有加CROSSLINKER一般非共价键结识会被解开的 09/21 21:51
5F：→ caesar0926: 以上个人认知 有错请纠正!!! 09/21 21:52
6F：→ LIAR: 加热与否会有影响吗？ 09/21 22:02
7F：→ blence: 或是S=S,先前看过有paper加50?mM DTT才把高MW拉回正常位置 09/21 23:45
8F：→ LIAR: 我加入sample buffer後，SDS=1%，β-me=5%，不会换算XD 09/22 00:54
9F：→ Ianthegood: 还是有可能 真的要就做alkylation看看吧 09/25 11:26