作者REIDO (NEET)
看板Biotech
标题[求救] 新买的NC膜泡到buffer会变波浪状
时间Thu Oct 2 23:35:43 2014
我之前和北极光买了新的Amersham的NC membrane
http://ppt.cc/S99S
http://ppt.cc/PnIg
原本里面是用铝箔袋装的，光是拿出来就要费很大的劲。我和学弟各自切了
自己要用的份，就各自用各自的。
不过真正让我傻眼的是，一放到transfer buffer里面，就变成波浪状了。
http://ppt.cc/pAMk
http://ppt.cc/INwI
实际用UVP拍可见光。
http://ppt.cc/Wn42
http://ppt.cc/XSfw
左边是Amersham的NC，右边是PVDF。可见光可以看到中间的NC有奇怪的痕迹，
NC中间较大的那张靠右也有痕迹只是较轻微。
实际观看的感想，有点像是好几层纸叠在一起，但是中间有几张有裂缝或是水痕的感觉。
http://ppt.cc/yBsP
http://ppt.cc/D21D
结果ECL一加上去，N-cadherin中间就乱成一团，相对右边的PVDF就好很多。
拿出来看就会注意到ECL没有均匀盖上，NC很明显会凸出来。就算把ECL
加满也一样(虽然有人不建议，但是我们实验室一直以来盖满ECL都没有问题)。
接下来是另一次的NC结果，左右都是NC。
http://ppt.cc/PQO5
http://ppt.cc/-aND
看最大张的部分，左右两组都有和上面一样奇怪的水痕，
左边那个原本就几乎没讯号，而右边也有不均匀的现象。
http://ppt.cc/CUvd
http://ppt.cc/3Ju3
上面是冷光，下面是和白光叠合，右边上面的讯号消失了。
中间和右边的两张，其实是上一组最右上边的膜，我剪开後继续染两个抗体。
讯号消失的位置一样。
我猜在曝光时间长的时候，膜凹凸不平造成ECL分布不均，可能会是出事的理由之一，
另外那个痕迹也可能是NC内部结构已经损坏，会不会造成较大的缝隙让protein抓
不够，或是反过来卡杂质就无法判断了。
请问有人有买同一牌的NC膜吗？有没有遇到同样问题，这要怎麽解决？
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小黄小黄别生气，明天带你去看戏。
我坐椅子你坐地，我吃鸡腿你啃骨。
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1F：推 abcam: 和代理商反应 换一卷最快 10/03 07:34
2F：→ abcam: GE的转渍膜 也是其他公司代工的，卖这麽贵 真的没道理。 10/03 07:35
3F：→ REIDO: 我的几个月的sample就这样升天了。 10/03 13:54
4F：推 lail: 我用过其他牌的...发生过，後来怀疑是methanol造成的，不过 10/04 21:44
5F：→ lail: 证实，但也不敢再用了 10/04 21:45
6F：→ blence: NC裁好先直接泡methanol? buffer? 或是H2O? 10/04 22:22
7F：推 kakaman: nc泡在transfer buffer,直接泡在Me OH会皱掉吧 10/05 16:29
8F：推 kaoru7568: 应该PVDF才要泡MeOH吧，NC感觉本身就亲水了 10/06 09:33
9F：→ a90648: NC泡MeOH会缩成一团 10/07 12:13
10F：推 machin: 推直接客诉处理会比较快!GE的是并购Whatman来的,品质应该 10/07 18:09
11F：→ machin: 不差才对 10/07 18:09