作者silverberry (平行线上的交集....)
看板Biotech
标题[求救] Gateway cloning
时间Sun Oct 5 01:35:22 2014
大家好，
我之前做 cloning 都是用 restriction enzyme 剪接法，
但是因为这次的 target vector 只能用 gateway，
所以第一次使用这个方法。
在 invitrogen 的 manual 里面建议，
pENTR vector 要用他们的 PureLink™ HiPure Plasmid Midiprep Kit 纯化。
而且不建议使用 Mini-prep (alkaline lysis)。
但是我看了这套 HiPure 的 manual，
里面也是 alkaline lysis，只是不是用 spin column 而已。
请问各位使用过 Gateway® LR Clonase II + Enzyme Mix 的版友，
我一定要换纯化 vector 的 kit 吗?
谢谢 m(_ _)m
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1F：→ blence: 只是建议用他们自家产品而已,没有说不适合用其他miniprep 10/05 03:50
2F：→ blence: genemark, viogene的miniprep用过也都ok 10/05 03:52
3F：→ turtle24: 就我的经验用其他牌也可以做 gateway 影响应该不大 10/05 04:16
4F：→ silverberry: 感谢楼上两位~ 10/05 08:25
5F：→ silverberry: 另外请问，如果我的 insert 是 pENTR 的两倍大， 10/05 08:26
6F：→ silverberry: 我还是用他建议的 insert:vector = 0.5-2:1 吗? 10/05 08:26
7F：→ silverberry: 还是应该反过来? 10/05 08:27
8F：→ blence: I:V=0.5~2:1，你把两者反过来不是也是0.5~2:1? 10/05 12:47
9F：→ Ianthegood: 是分子量不是重量喔 10/05 18:07
10F：→ silverberry: 喔不好意思，我没说清楚，我是手册上写 molar ratio 10/05 22:30
11F：→ silverberry: b 大真是一语惊醒梦中人~ 10/05 22:31
12F：→ silverberry: 不过因为 pENTR 我都加 1 uL，所以是调整 i 的量 10/05 22:31
13F：→ silverberry: 所以没想清楚 @ @ 10/05 22:31