作者ffmichael229 (御琉光)
看板Biotech
标题[求救] RAW264.7的细胞体外减缓过敏实验的实验设计
时间Wed Oct 15 16:01:09 2014
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让，
请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
目前实验的设计是想做细胞体外减缓过敏的实验，实验已选定某种成分做为材料，希望
这种成分能有减缓过敏的效果，因此就想看某些细胞激素(cytokine)的分泌状况(例如:
IL-10 IL-4)，实验的主要的设计是先以药物溶液(药物溶液已用MTT抓过浓度)处理RAW
细胞24小时(对照组就不会进行药物处理)，接着加入LPS进行诱导，然後希望看到有经
过药物先行处理的组别能够在於细胞分泌IL-10或者IL-4的表现量有所下降，用以证明
药物处理能够有减缓过敏的效果，但是问题就来了，在网路搜寻文献的过程中，有遇
到LPS要一同添加IFN-r的文献，也就是LPS+IFN-r，我知道那个是要诱导RAW细胞(NO-t
ype)产生NO所添加的东西，但由於我并没有很深的相关背景，所以并不了解IFN-r的添
加与否会不会对我的细胞激素表现实验造成影响，因此第一个问题想问问若我的实验单
纯只以LPS进行诱导是否OK?? ，另外也想请问LPS的用量会是多少比较合适?
由於参考许多文献 从1ng/ml~10ug/ml都有，不过我目前是打算采用1ug/ml，
这部分也想请问各位前辈的意见，感谢!
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1F：推 RickyKckao: IFN-r绝对会影响cytokine表现 像是induce TNF-a等 10/16 11:22
2F：→ RickyKckao: 要看你实验的目的来决定要不要两个都加 如果两个都加 10/16 11:22
3F：→ RickyKckao: 跟单独加 要看的意义不同 那是要看有没有syngernize 10/16 11:24
4F：→ RickyKckao: 或是会有antagonistic effect 10/16 11:25
5F：→ RickyKckao: LPS的用量没有绝对, 你可以自己在做个titrate抓最适合 10/16 11:27
6F：→ RickyKckao: 看cytokine表现的条件 10/16 11:27
7F：→ RickyKckao: 另外单独只看IL-10跟IL-4的表现 来决定药物是否有效 10/16 11:31
8F：→ RickyKckao: 可能不是很洽当 IL-10是anti-inflammatory cytokine 10/16 11:31
9F：→ RickyKckao: 如果药物让IL-10的表现变低了, 那也有可能造成更严重 10/16 11:32
10F：→ RickyKckao: 的过敏 的确许多过免都是偏向Th2 response 但你可能不 10/16 11:33
11F：→ RickyKckao: 能单单只选几个M2的代表性cytokine来show药物的功效 10/16 11:34
12F：→ RickyKckao: 再者 LPS+IFN-r 会诱导M1基因的表现 那你想测的IL-10 10/16 11:37
13F：→ RickyKckao: 跟IL-4可能就更不好测了... 10/16 11:37