作者goodday06 (goodday)
看板Biotech
标题[讨论] 关於细胞Total DNA 萃取的问题
时间Sat Oct 25 13:24:49 2014
gDNA 或是Total DNA 萃取，
如果是用Kit 抽可以得到很漂亮的singale band (约位在1kb marker 所有band 之上)
然後拉出微弱的smear 到下面。
最近我试了几种buffer 用Phenol/Chloroform 萃取，
有的情况DNA smear: 大约从2kb 拉到底下的smear
有的情况是DNA 完全 degrade: 约在200bp 左右出现大坨band
想请教的是:
1. 为什麽用kit 抽出来是很漂亮的single band?
是因为gDNA 太大所以挤成一条band 吗?
2. 若DNA 萃取样品主要呈现Smear, 表示protocol 不好，萃取失败吗?
先感谢分享指教
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1F：推 KittyGod: 用Kit不加RNaseA抽 有时低bp处也会有大驼band 10/25 14:53
2F：→ Ianthegood: 用p/c/i抽如果不要伤得太严重也不太会smear 10/27 01:00
3F：→ Ianthegood: integrity吧 10/27 01:00
4F：→ xxtomnyxx: 好像有些 Kit 上有注明 kit 抽出来的 DNA 是 30~50 kb 10/27 23:38
5F：→ xxtomnyxx: 的片段？ 10/27 23:38
6F：→ silverberry: QIAGEN 的 DNeasy 抽出来主要是 30 kb, 但 up to 50 10/29 04:35
7F：→ silverberry: kb, 一般分析都可以用，如果要 > 50 kb 就要另外挑 10/29 04:36
8F：→ silverberry: kit 或是 ethanol (isopropanol) 沉淀小心抽了 10/29 04:37