作者vantis (凡提斯之猫)
看板Biotech
标题[求救] 用whole blood检体跑flow
时间Mon Nov 17 20:34:10 2014
flow新手第一次在此发问
想请问各位前辈,若要分析neutrophil surface marker,
whole blood sample如果自采检後,放置於冰箱冷藏两天後才进行实验
是否会严重影响到细胞活性?
最近因为上flow遇到细胞都变成debris的问题,完全无法分析~非常苦恼
作法:
1.将antibody mix好
2.加入100ul whole blood, 4℃ incubation 30 mins
3.加入lysis buffer, RT incubation 12 mins
4.1200rpm 4℃ 5 mins centrifugation, discard supernatant
5.加入1 ml staining buffer wash
6.1200rpm 4℃ 5 mins centrifugation, discard supernatant
7.加入500ul staining buffer, suspension pellet
8.上机
reagent都是BD commercial
最近做flow结果时好时坏,不是很稳定~真的很苦恼啊!
不知道有没有什麽小罩门可以传授
非常谢谢大家解惑喔!
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※ 编辑: vantis (111.243.240.232), 11/17/2014 20:39:35
1F：推 jabari: 检体新鲜 标完抗体 fix完再放冰箱 放两天有点久?? 11/17 21:29
2F：推 qiet: 冰两天一定烂光光阿，染完用2%PFA固定吧 11/17 21:39
3F：→ saviora: 细胞不固定放这麽久当然破给你看 11/18 00:40
非常谢谢各位回答!
因为目前主要卡在检体供应端的地方
也就是有时候我拿到检体的时候已经放置两天左右
老板会觉得放一天还做得出来,放到两天影响会这麽大吗?
不过从推文看起来,看起影响真的不小!
所以...只好去跟老板好好谈谈吧XD
※ 编辑: vantis (111.243.240.232), 11/18/2014 05:16:27
4F：→ yuasa: Neutrophil几个小时候就开始死了啦，况且你又没做任何处理 11/18 20:57
5F：推 theonedelete: 试过放一天，勉强可以，两天就完全不行了 11/18 21:16
6F：推 lesswind: cell放超过6小时就要固定了...不然就会坏掉了QAQ 11/20 23:02