作者shunminhsu (sharkhsu)
看板Biotech
标题[求救] 如何让酵素SanDI(KflI)失活!!??
时间Sun Nov 23 08:08:15 2014
由於实验上的需求，所以要用到SanDI及另外一种酵素(非快切)去切质体。但SanDI
剩快切有货，和老师商量後下订。但在最近要使用时才发现这只酵素无法热失活，
说明书上面是建议用phenol/chloroform extraction..不过实验室里面并没有这些
药品，所以想请问各位前辈，是否有其他的办法使其失活呢?
现在有考虑过使用plasimd的kit纯化，但不晓得可不可行..老师也不太确定 囧
深怕SanDI没弄乾净的话，第二支酵素会切不了阿..
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1F：推 skybreeze: kit 应该是不会保留protein,但也只能试试看 11/23 09:11
2F：推 Ianthegood: 直接做double digest? 11/23 12:38
3F：→ nawussica: phenol chloroform 好取得 看这萃取法会不会做而已 11/23 12:44
是的..现在就是担心对这手法不熟悉，毕竟後面还要再切第二刀。怕第一次弄完，整个浓
度会掉光..不够切第二刀.
4F：推 leptoneta: 苯酚和氯仿今天订明天就来了 也不贵 11/23 14:06
5F：→ blence: 前面就问过了,既然SanDI都买FD的,另一个也有FD版可用阿 11/23 14:14
6F：→ blence: 至於要不要HI取决你下一步要做什麽,如果是要跑胶,根本不用 11/23 14:17
感谢blence大热心回答，但这两支酵素似乎没办法一起double digest.. 至於切完的话，
是要做ligation用的..
7F：→ turtle24: 我这边跑环安流程订氯仿用了一个月唷XDD 11/23 15:26
8F：推 huuban: phenol/chloroform小量的话直接去找别间实验室要比较快 11/23 16:33
9F：→ huuban: 但是超过一定量带离实验室一样要过环安卫 11/23 16:34
※ 编辑: shunminhsu (114.33.254.149), 11/23/2014 17:11:03
10F：→ blence: 如果只是ligation,HI需要烦恼吗？ 11/23 17:21
11F：→ blence: 你要问非双切的步骤?还是如何失活? 看起来就不是後者阿 11/23 17:23
呃..说明书就写:Optional: Inactivate the enzyme by phenol/chloroform extraction
现在问题卡在不晓得这个步骤是不是必要的..怕酵素如果真的没失活或拿掉的话会有影响.
因为处理双切完的plasmid还要用ExoIII下去做反应...
※ 编辑: shunminhsu (114.33.254.149), 11/23/2014 18:36:18
12F：推 Ianthegood: 如果bfr condition是ㄧ高一低的话 可以试试先做低的 11/23 21:14
13F：→ Ianthegood: 反应完直接补盐做高的 11/23 21:15
感谢good大的建议..但一个是快切buffer 另一个是普通buffer 这样可行吗!?
酵素好贵阿..不太敢乱浪费XD
※ 编辑: shunminhsu (140.123.126.146), 11/24/2014 09:04:45
14F：→ cillion: PCR clean up kit 11/24 21:32
OK 我会试试看的! 只是比较不懂的是.. 其他快切酵素的说明书几乎都有用kit的步骤，
唯独这支酵素都没写，搞得我好乱阿 冏
※ 编辑: shunminhsu (140.123.126.146), 11/25/2014 08:41:26
15F：推 jimmy80727: 大不了切一刀跑胶回收再切第二刀 12/02 02:33
16F：→ travelmat: clean kit or gel extration 12/14 15:22