作者dorisaq2791 (dorisaq2791)
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标题[求救] 24 well 怎麽将细胞分匀 ?
时间Sun Dec 7 02:29:36 2014
我有爬过一些文，但不甚了解，而且我的问题跟大家似乎不太一样@ @
我的问题是将细胞分至24 well 时细胞并不会均匀分布
总是呈现中间较少 旁边较多的情形
我的作法
将细胞悬浮夜和medium依所需比例混合均匀後放入50cc离心管 以Glass pipet mix均匀
分细胞时也是以GP分 ，每滴3 well 即再度mix
然後就直接送进培养箱了 没有作其他摇晃
在细胞液体积部分 我是分得很平均的 每个well都很接近
在刚分完时有在显微镜下看过，感觉都细胞分布很平均
不过当细胞贴好，一拿到显微镜下就破功了... 中间很稀少，在well边缘较集中
实验室学姐说有可能是在滴细胞液时的速度不对
想问大家有没有什麽想法 ，因为我也不是每次都分的不平均@ @
想知道除了滴细胞夜速度方面是不是有其他问题
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※ 编辑: dorisaq2791 (118.171.191.42), 12/07/2014 02:31:19
1F：→ blence: 前面怎麽mix都没差,well会分布不均跟加入well之前动作无关 12/07 02:41
2F：→ blence: 加入之前mix只影响各well细胞数,之後的摇晃才影响分布 12/07 02:43
3F：→ vetvet: 加入的时候，先在well中间加少量，等每孔都加完了，再调整 12/07 16:11
4F：→ vetvet: 每孔的medium量到所的量，再轻轻的敲一敲，让细胞散开就好 12/07 16:13
5F：→ raiyu: 最後每well的medium量大约是多少? 12/07 22:14
6F：→ raiyu: 太少容易分布不均(不过比较容易是挤在中间或某区) 12/07 22:16
7F：→ raiyu: 可以像楼上说的 先加部分medium在well中再加细胞液 12/07 22:18
8F：→ raiyu: 最後500ul/well左右 再前後左右轻拍 应该就可以 12/07 22:20
9F：→ dorisaq2791: 1 12/08 00:57
10F：→ dorisaq2791: 抱歉我不太会用b版， 我的细胞液总体积是1ml 12/08 00:58
11F：→ dorisaq2791: 谢谢大家 我会再试试看 12/08 01:00
12F：推 chaunen: 直接滴入well 不要摇 hood里放个10分钟等细胞贴 12/08 20:56
13F：→ chaunen: ex:1*10^5 cells in 500ul per well 10个well就配11份 12/08 21:00
14F：→ chaunen: 在50ml tube pipette均匀後吸500ul 滴入well 12/08 21:02
15F：→ chaunen: plate一摇到就GG了 12/08 21:03
16F：→ chaunen: 另外要注意hood桌面的水平 不然会发现细胞密度呈现梯度 12/08 21:05
17F：→ chaunen: well越大越明显 尤其10cm 12/08 21:06
18F：推 chaunen: 中间少旁边多应该是medium太少 24well要400ul以上较保险 12/08 21:11
19F：→ chaunen: 摇摇苦手经验留 12/08 21:12
20F：→ blence: 原po都说总体积1ml了,显然不是medium太少 12/08 21:15
21F：→ joe0725a: 我以前也遇过，你可以每次入well前先用tip mix均匀 我是 12/24 03:49
22F：→ joe0725a: 总体积超过30mL 我会分两馆 12/24 03:49