作者Gilver (吴右手)
看板Biotech
标题[求救] in situ 固定时detergent加太少
时间Fri Dec 19 01:06:13 2014
小弟我在做植物的RNA in situ hybridization 时，
不小心在第一步使用的组织固定液4% paraformaldehyde in PBS溶液中
将Tween 20和Triton X100 两种detergent误加成原本建议浓度0.1%浓度的千分之一，
但在抽气固定的时候有将组织充分抽气渗透 (抽到60mmHg组织才上浮)
想请问各位先辈的意见，如果detergent浓度加低了会不会对杂合结果造成显着影响呢?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 1.160.85.28
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※ 编辑: Gilver (1.160.85.28), 12/19/2014 01:07:32
1F：推 Ianthegood: 没有permabilise你的probe怎麽进的了膜 12/19 09:48
2F：→ Gilver: 因为後面还有Protease处理，还会再细胞打洞一次 12/23 21:06
※ 编辑: Gilver (140.112.52.118), 12/23/2014 21:06:33
3F：→ Ianthegood: 如果膜没破 你protease只吃的到extracellular domain 12/24 00:06
4F：→ Gilver: 那请问有机会在脱蜡後hybridization前再帮细胞打洞吗？ 12/24 02:35
5F：→ Gilver: 比如说在4%formaldehyde或PBS的缸里加入triton之类的 12/24 02:37
6F：→ Ianthegood: 你做做看嘛 失败了就重来嘛 这次就不要搞错 12/24 22:10