作者gto33456789 (太人生了)
看板Biotech
标题[求救] IHC
时间Fri Jan 16 00:45:16 2015
大家好
最近把自己表现出来的蛋白质 给生技公司打完抗体
开始染IHC
用的是biogenex immunohistochemistry KIT
之前的问题解决了
( 把生技公司附上的兔子normal serum 改成 commerical goat normal serum)
就不是整片阳性singal了
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但现在又出问题了
我的target cell会锁定在软体动物的神经上的病毒
但现在不管是染(跑PCR病毒阳性片或阴性)的病理切片
在神经的细胞上都有些许的讯号
导致现在无法确定这抗体的专一性
请问我接下来该如何trouble shooting..
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另一个问题是
我的ㄧ抗是rabbit anti-我的protein
而我的二抗是commerical的KIT里面的
为什麽再blocking的时候, 放rabbit serum
整片就都上阳性
而改用goat serum就比较正常
照道理我的组织切片不会有兔子血清里的任何抗体给结合上阿
谢谢大家
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1F：→ blence: 你一抗是rabbit anti-protein,二抗不就是xxx anti-rabbit 01/16 01:09
2F：→ a90648: 你一抗是rabbit 又用rabbit serum blocking?! 01/16 01:17
3F：→ a90648: 二抗下去当然全部中奖阿.... 01/16 01:19
4F：→ gto33456789: = = " 是的.. 01/16 02:22
5F：→ gto33456789: 它那张抗体公司的表就叫我用来稀释一抗与当serum阿.. 01/16 02:24
6F：→ coswater: 如果病毒确定不会出现在其他动物，可以找别的物种切片 01/17 09:15
7F：→ coswater: 当做negetive control，然後找一片确定有病毒的软体神经 01/17 09:16
8F：→ coswater: 切片，当作positive，比较看看两者的差异 01/17 09:17
9F：→ gto33456789: roger that 01/20 11:29