作者jiuen217 (Pan)
看板Biotech
标题[求救] PCR negative control鬼打墙
时间Fri Jan 16 10:03:44 2015
各位大大好
前天我做PCR的时候，发现negative control有band出现
所以我为了想知道是哪边出的问题，昨天就测试了几个negative control
但是结果却让我怎麽想都想不通
图片如下:
http://ppt.cc/YPVH
PCR做法我是将bf和dNTP跟酵素先做pre-mix，再分到其他管
水和引子是一管一管加
一个月前我测试primer condition的时候
用A引子做的negative control跟第二组一样
但是同样的reagent用其他引子做negative control就没问题
这个月做的时候，水已经换新的了(跟一个月前的水不同)
也是前几天做PCR，用别的引子当negative control就OK
到了前天，用A引子做negative control就不行
但是如果是稀释的A引子污染的话
第四组用新的水做negative control就又OK....
而且第一、二组的band还长得不一样
我真的搞不清是哪里出问题了....
请大家救救我~~~谢谢
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1F：推 scherzoinb: 就图中的1，4，我会说水有污染，因为4是正常的， 01/16 10:43
2F：→ scherzoinb: 不妨多作new A primer+new ddH2O，也要是没有band。 01/16 10:45
3F：→ scherzoinb: 图3，没有band，只能说没有primer可以夹出来的东西， 01/16 10:49
4F：→ scherzoinb: 不妨多作old B primer+new ddH2O，也要是没有band。 01/16 10:50
5F：推 tynse71864: 同一楼 做一个new primer+new H2O 01/16 12:17
6F：→ blence: (1,2)都有东西,所以水有问题,(3)不同primer效率不同难比较 01/16 13:04
7F：→ blence: 我觉得标题讲internal control好像怪怪的 01/16 13:05
8F：→ eric2853: 应该是negative control吧 01/16 13:19
9F：推 ljii: 害我看到internal control就觉得是RT, 进来才发现不是... 01/16 13:41
Sorry打错，已经改好了
谢谢大家的建议，我会再试试看
※ 编辑: jiuen217 (163.25.92.108), 01/16/2015 13:44:56
10F：推 skyken10: 我好奇你的样本是原核or真核？ 01/17 17:26
11F：→ jiuen217: 真核，是human的 01/26 10:17