作者jmrla (我和你走散了。)
看板Biotech
标题[求救] 有关GC rich的PCR
时间Sun Feb 1 13:02:34 2015
实验中一直遇到某基因处理药物後的表现无法有一致性
曾经做过几次预期的结果
却近几次都做不出这些结果
曾经怀疑几个原因
目前觉得可能跟GC rich有关
之前也是有p过其他GC rich的片段
大致都是没有GC rich buffer就完全p不出来
加了GC rich buffer就p得出来
而我现在遇到这个某基因
则是有时候p得出来有时候p不出来(在都没有加GC rich buffer时)
想询问GC rich片段会有这样的情况吗
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.4.203
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1F：→ blence: 是不是GC rich并不是二分切半,而是一个比例 02/01 18:11
这个我说明一下
先前是在做这段基因promoter片段时
意外发现他的promoter部分GC比例很高
当时也有回来看CDS的部分
那时候觉得可能CDS部分GC比例不高
就没有怀疑GC rich原因
现在因为一直做不出一致性(甚至基因表现一下有一下没有)
又回来怀疑是GC rich原因
而且算了一下promoter和CDS的GC比例差不多
所以觉得是不是GC rich
2F：推 qiet: 要测表现的话应该可以挑其他片段吧, 避开GC rich region 02/01 18:55
因为CDS不长
所以避不大开T_T
目前是好奇如果PCR遇到GC比例较高的片段
GC rich buffer的有无
对於PCR结果是全有全无
还是机率问题呢
谢谢:)
※ 编辑: jmrla (140.112.4.203), 02/01/2015 19:51:20
3F：→ blence: 这麽说好了,假设80%是rich,50%是一般,难道没有70%,65%吗？ 02/01 20:48
4F：→ blence: 我的意思是GC rich本来就不是二分切半,而是一个相对比例 02/01 20:48
5F：→ blence: 怎会用有无rich这种类别变向,来描述连续变向对PCR的影响呢 02/01 20:51
6F：→ blence: 另外,多数时候你可能只用一般buffer发现有产物就看结果了 02/01 21:00
7F：→ blence: 不会每次都拿GC buffer来比较,当然才容易遇到全有全无 02/01 21:01
8F：推 jabari: ....那就买个GC专用的Taq吧QwQ... 02/02 14:05