作者dcpick2001 (*剑影*)
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标题[求救] [生化] 一题台大生化实验题组
时间Sun Feb 1 21:40:45 2015
大家好， 最近写到一题台大生化的实验题题组
有点困惑， 问了周遭的朋友几乎都不会
所以来版上请教一下各位高手们
题目在此
http://ppt.cc/7fDb
有人可以跟我解释这个实验的进行大约是在做什麽吗?
感激不尽^ ^
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1F：推 shelix: 把cDNA(insert)放入vector後做cloning,筛出正确的colony 02/01 22:31
2F：→ shelix: 再用restriction enzyme做double digestion check 02/01 22:32
3F：推 liuse: CBE 02/01 22:39
4F：→ dcpick2001: 感谢> < 但想知道为什麽48是E? 02/01 23:45
5F：→ roy047: 应该lane"4"才是double digestion, 切出1.5kb就是cDNA 02/02 07:26
6F：→ roy047: 错字不少 02/02 07:26
7F：→ Ianthegood: 为什麽切一刀会有6k跟3k啊 02/02 10:59
8F：→ untilnow: single enzyme 和切一刀有点距离 02/02 11:04
9F：推 yadayada: 好恐怖的英文~抖 02/02 11:12
10F：→ blence: 我也想不出单纯NdaI会切出6k跟3k 02/02 11:40
11F：→ Ianthegood: 如果ndei>1, 那ndei+bamhi应该要有3+片段吧 02/02 13:26
12F：推 as862437: 应该是Nde I 在Lane3切位上不只一个，才会有小片段吧 02/02 17:38
13F：→ Ianthegood: 对啊 啊lane4怎麽没有多出来的片段 02/02 17:52
14F：→ blence: 如果Lane3 NdeI切为不只一个,整个是9k也跟Lane1,3不一致 02/02 18:28
15F：→ blence: 更何况考cloning,选用的RE竟然用非单一site,这是错误学习 02/02 18:31
16F：推 ararthur: CBE 02/02 22:19
17F：推 ararthur: 这英文...题组是谁出的阿= = Lan2我还猜想最高的是gDNA 02/02 22:27
18F：→ ararthur: contamination+ nick form, supercoiled form XDDD 02/02 22:28
19F：→ ararthur: 但Lane3的 3k band... 02/02 22:29
20F：→ ararthur: 我晓得了 cDNA上有BamHI site而且还在正中间 所以答案应 02/02 22:31
21F：→ ararthur: 该是CBA(?) 基本上MCS上的cut sites不可能出现在vector 02/02 22:32
22F：→ blence: cDNA上有无BamHI都无法解释Lane3 NdeI那3kbp的由来 02/02 22:35
23F：→ ararthur: 但BamHI sticky end是可以和一些RE的cut site合的 所以 02/02 22:35
24F：推 ararthur: 概念上合理(?) 有误可以来讨论 02/02 22:36
25F：→ ararthur: 因为cDNA长度3k (所以lane3的最上面是全长9k) 02/02 22:38
26F：→ ararthur: 而Lane4的1.5k位置则是有两段产物... 不过这变成智力测 02/02 22:39
27F：→ ararthur: 验了... 02/02 22:39
28F：→ blence: 不管Lane4的1.5k有几段产物,你还是没解决Lane3的3k怎麽来 02/02 22:46
29F：→ blence: 至少你应该先假设有两个NdeI吧....虽然这样也难解释其他的 02/02 22:47
30F：→ ararthur: 3k 是cDNA全长 cDNA正中间有个BamHI cut site 所以lane3 02/02 22:58
31F：→ ararthur: 阿 抱歉 谢谢楼上提醒 我忽略应该是有2个NdeI在MCS两端 02/02 22:59
32F：→ ararthur: (在我的天马行空假设下) 02/02 23:00
33F：推 ararthur: 阿 我错了 即使有两个NdeI BamHI在cDNA多一个 lane3还是 02/02 23:05
34F：→ ararthur: 不合理... 02/02 23:05
35F：推 jabari: 先别说这些... lane 2有3条 ..庄老师有没教过怎麽办纯化@@ 02/02 23:08
36F：→ jabari: 你要说lane3的3K是super coil我也认了 Lane2那啥? 断光光? 02/02 23:09
37F：→ blence: 其实Lane2以全长7k来说,supercoil最低出现在近5k是合理的 02/02 23:12
38F：推 jabari: 这样也算合理啦.. 不过lane3这太威了 QwQ 02/02 23:13
39F：推 ararthur: agree with blence 02/02 23:14
40F：推 shelix: 应该打电话去问...搞不好这题送分(?) 02/02 23:38
41F：→ dcpick2001: 感谢大家的忙^ ^ 02/03 22:56
42F：推 leoblack: 英文真的颇呵...... 02/06 13:35